Luminex Multiplex Assays

Technologie xMAP

La technologie xMAP s’applique à deux types de microbilles : magnétiques et en polystyrène.  La microbille magnétique Magplex™ est une microsphère superparamagnétique de 6,5 microns avec un noyau magnétique et une surface de polystyrène.  La microbille de polystyrène MicroplexTM est une microsphère en polystyrène de 5,6 microns. Les deux types de microbilles sont teintés intérieurement avec des proportions précises de fluorophores rouges et infrarouges. Les proportions différentes des fluorophores rouges et infrarouges donnent 100 microsphères de signature spectrale uniques qui sont identifiées par les systèmes de détection Luminex xMAP.  La conjugaison d’un anticorps monoclonal distinct à une microbille distincte permet d’analyser plusieurs analytes dans un seul puits.

La microbille en polystyrène nécessite des plaques de filtration coûteuses et parfois difficiles à utiliser. Ce type de microbilles complique également l’automatisation du dosage.  La microbille magnétique offre des avantages importants par rapport à la microbille de polystyrène, en raison d’une facilité de manipulation et d’une flexibilité supérieures.  Cette facilité de manipulation résulte de la possibilité d’utiliser une plaque à fond plat avec un laveur de plaques manuel magnétique (réf. EPX-55555-00) ou un laveur de plaques magnétique automatisé.  En outre, un système de plaque filtrante / collecteur à vide, couramment utilisé avec des microbilles de polystyrène, peut également être utilisé avec des microbilles magnétiques.

Instrumentation Luminex

L’instrumentation Luminex comprend trois modèles d’instruments : MAGPIX, LX200 et FLEXMAP 3D. Ces instruments sont basés sur les principes de la microscopie fluorescente quantitative ou cytométrie en flux fluorescente. La capacité de quantification multiplex d’un dosage dépend du modèle de l’instrument et varie de 50 analytes avec le MAGPIX à 500 analytes avec le FLEXMAP 3D.  Utilisée en association avec ProcartaPlex, la plateforme Luminex permet une analyse de profilage immunologique rapide et économique.

Le Luminex System est une série de trois instruments d’analyse flexible, basée sur les principes de la microscopie fluorescente quantitative ou de la cytométrie en flux fluorescente qui est conçu pour répondre aux besoins de laboratoires de recherche de toute taille. Le système multiplex permet de mesurer simultanément jusqu’à 80 analytes différents à partir d’un seul puits de microplaque, en utilisant de très faibles volumes d’échantillons. Le système permet un profilage rapide et économique d’immunoessais et l’analyse d’expression génique grâce à la mesure quantitative multiplex et à la détection de protéines, d’ARN et d’ADN.

Le Luminex System résulte de l’association de trois technologies principales xMAP. La première est constituée des microsphères xMAP, un ensemble de 100 microsphères magnétiques de 5,6 microns teintées par fluorescence (microbilles) et de microsphères de polystyrène de 5,6 microns. Les deux types de microbilles servent à la fois à identifier les cibles et à la fixation à la surface solide pour construire le dosage. La seconde technologie est composée d’appareils d’imagerie fluorescente et de cytométrie en flux, le Luminex Magpix et l’analyseur Luminex 200/FLEXMAP 3D qui comprennent, respectivement, des composants essentiels de détection xMAP comme les diodes électroluminescentes (LED) et une caméra CCD ou des lasers, des technologies optiques et fluidiques avancées, et des processeurs de signaux numériques haute vitesse. La troisième composante sont les dosages conçus autour des microsphères.

MAGPIX

Plus récemment, Luminex a lancé le système MAGPIX qui est fondé sur les principes de l’imagerie de fluorescence. Les lasers et les tubes photomultiplicateurs (PMT) ont été remplacés par des diodes électroluminescentes (LED) et une caméra CCD pour fournir une plateforme de multiplexage économique, compacte et fiable. L’instrument compact MAGPIX est capable de mesurer et de quantifier simultanément jusqu’à 50 analytes dans un seul puits de microtitrage lorsqu’il est utilisé avec des microsphères magnétiques (microbilles) (décrites ci-dessus). L’instrument MAGPIX est idéal pour les laboratoires à faible et moyen débit pour l’analyse quantitative des protéines, de l’ARN et de l’ADN dans une variété de puces d’échantillons.

Luminex 200 et FLEXMAP 3D

Le Luminex 200 and FLEXMAP 3D reader associe deux lasers, la fluidique et un traitement de signaux numériques en temps réel pour distinguer jusqu’à 80 séries différentes de microsphères magnétiques codées par couleur, chacune portant un dosage différent. Le lecteur Luminex constitue un outil essentiel qui effectue les fonctions essentielles de la technologie multiplex :

Fluidique

Le lecteur détecte les microbilles individuelles par cytométrie en flux. Le système fluidique du lecteur aligne les microbilles dans une seule file au moment où elles entrent dans le flux liquide puis entrent dans la cuve à flux. Une fois que les microbilles sont dans une seule file dans la cuve à flux, chaque microbille est analysée individuellement pour détecter la couleur de la microbille (analyte) et la force du signal de dosage (intensité de fluorescence PE).

Lasers

Le lecteur utilise un laser vert de 532 nm (laser "dosage") pour exciter le colorant PE du dosage (streptavidine-PE). Le laser d’état solide de 635 nm (laser"classé" rouge) sert à exciter les colorants à l’intérieur des microbilles pour déterminer leur "couleur" ou leur "région" et il est également utilisé pour la discrimination de doublet par diffusion de la lumière.

Détecteurs

Le lecteur comporte quatre détecteurs, un pour chacun des trajets optiques représentés sur la figure ci-dessous. Les détecteurs servent à mesurer la fluorescence du dosage, à déterminer les microbilles (1 à 100) et enfin pour discriminer entre les microbilles uniques et les microbilles agrégées.

Laveur de plaques magnétique manuel pour dosages de microbilles magnétiques

Nous avons conçu un laveur de plaques magnétique manuel exclusif (vendu séparément) pour simplifier le lavage des microbilles.