Aperçu

Les systèmes de PCR en temps réel Applied Biosystems QuantStudio détectent des variations aussi faibles que 1,5x. La plupart des systèmes peuvent également fournir une séparation reproductible sur 10 logarithmes du modèle d’entrée.

 

Le logiciel fournit des outils en ligne pour analyser les données des systèmes QuantStudio. Le logiciel se fonde sur Connect, notre plateforme cloud, pour fournir des outils d’analyse extrêmement polyvalents, qui sont flexibles, rapides, faciles à utiliser et facilitent la compréhension fonctionnelle de la qPCR et des données associées.

 

Ces modules permettent aux utilisateurs de combiner plus de 100 expériences de génotypage, d’expression génétique ou d’autres qPCR dans un projet et d’analyser les données en quelques minutes. Les modules proposés incluent la conception et l’analyse, l’analyse HRM (fusion par haute résolution), l’analyse de présence / absence, la courbe standard, le génotypage, l’analyse de hPSC Scorecard et la quantification relative. Voir les exemples ci-dessous.

Sensibilité

Détection de discrimination aussi faible que 1,5x

Groupes distincts indiquant une discrimination à 2x et 1,5x sur le système QuantStudio 7 Pro avec une confiance de 99,9 %, ce qui équivaut aux autres plates-formes Applied Biosystems, QuantStudio 7 Flex et aux instruments 7900HT. Des échantillons d’ADNc totaux du foie présentant des différences 2x et 1,5x dans les données d’entrée ont été évalués. Les cycles ont été analysés avec leur logiciel de plateforme respectif, avec seuil automatique et ligne de base, puis exportés et analysés avec le logiciel de statistiques SAS JMP v13.

Le tracé de l’amplification montre la détection des variations dans les expressions 1,5x à l’aide du système QuantStudio 7 Pro. Une série de dilutions du plasmide KAZ a été amplifiée. L’axe vertical représente la variation de fluorescence normalisée du colorant ROX. L’axe horizontal augmente le nombre de cycles de gauche à droite. Ce fait est vérifié en traçant une courbe standard sur la droite. L’axe vertical de la courbe standard est la valeur seuil du cycle et l’axe horizontal est la série de dilutions dont la concentration augmente de gauche à droite.

L’amplification de l’ADN plasmide KAZ dans les dilutions 10x a été réalisée à l’aide du bloc à 96 puits et montre une séparation hautement reproductible sur les 10 logarithmes de la quantité des modèles d’entrée. L’axe vertical est le logarithme de la fluorescence soustraite du fond normalisée du colorant ROX. L’axe horizontal augmente le nombre de cycles de gauche à droite.

Détection de copie unique

Une seule copie du plasmide KAZ en bleu par rapport au NTC en violet. Le système QuantStudio 7 Pro détecte en permanence une seule copie, clairement distinguable des NTC (43/48 puits positifs). 

Multiplexage

La réaction multiplexe détecte l’ARNr 18S marqué avec le colorant VIC et le gèneTGFb avec les sondes et amorces TaqMan marquées FAM. La réaction a utilisé le mélange Master Mix rapide et a été exécutée en 96 réplicats. L’axe vertical reflète la variation de fluorescence normalisée du colorant ROX, et l’axe horizontal reflète l’augmentation des cycles de gauche à droite. Les valeurs CT montrent une séparation claire et cohérente des produits avec une déviation standard faible entre les réplicats.

Génotypage

Ces graphiques montrent comment les visuels améliorés et les graphiques de discrimination allélique dans l’application de génotypage permettent de distinguer avec précision les vrais signaux du bruit de fond.

HRM

L’application Analyse HRM (fusion par haute résolution) est une méthode d’analyse post-PCR utilisée pour identifier les variations dans les séquences d’acides nucléiques. La méthode détecte de petites différences dans les courbes de fusion (dissociation) de PCR activées par des colorants à forte luminosité, liant l’ADN double brin en conjonction avec les systèmes QuantStudio. Le contrôle précis de la rampe de température du système, les capacités de capture de données avancées et le logiciel d’analyse HRM la rendent parfaitement adaptée à l’analyse HRM.

 

 

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.