Transfert de méthode
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Le transfert de méthode consiste à adapter une méthode d’analyse à un système HPLC différent. Plus les deux instruments sont similaires, plus le processus est simple.

Les types classiques de transferts de méthodes comprennent la conversion de méthodes HPLC en méthodes UHPLC afin d’optimiser la vitesse et le débit. D’autres cas de figure impliquent le transfert d’une méthode validée d’un laboratoire à un autre, par exemple de la recherche et du développement aux opérations ou à un laboratoire clinique.

Quelle que soit la similitude des systèmes, les transferts d’un instrument à l’autre sont souvent source de variabilité en raison des différences entre les technologies matérielles et logicielles, notamment pour les systèmes provenant de fabricants différents. 

Paramètres matériels affectant le transfert de méthode

Des paramètres tels que le volume de délai du gradient, les types de pompe, les modes de chauffage de la colonne, le volume de la cellule de flux du détecteur, les réglages du détecteur et les volumes de colonne supplémentaires ont un impact sur la reproductibilité d’une méthode transférée. La meilleure façon de surmonter les difficultés lors du transfert de méthodes et d’obtenir des résultats équivalents avec les deux instruments est de prendre en compte l’ensemble des paramètres d’un système lors du transfert.

Volume de délai de gradient (GDV)    

Le volume de délai de gradient est le volume entre le point de mélange des éluants et la tête de colonne.

  • Le GDV de l’instrument joue un rôle central dans le transfert réussi d’une méthode HPLC ou UHPLC. Pour en savoir plus ›
  • Les modifications du GDV d’un instrument à l’autre peuvent altérer la résolution et le temps de rétention, c’est pourquoi le changement de GDV est une solution fréquemment utilisée dans le transfert de méthodes. Pour en savoir plus ›

Sachant que le GDV est variable pour tous les instruments, il n’est pas toujours facile de faire correspondre la différence de volume.

Facteurs affectant le volume de délai de gradient

Le GDV est affecté par tous les volumes entre le point de mélange de la phase mobile et la tête de colonne, mais, généralement, la pompe est la principale contributrice. Outre les volumes des mélangeurs, le type de pompe est essentiel, car les pompes de mélange à basse pression présentent des GDV nettement plus élevés que les pompes de mélange à haute pression.

Les effets de mélange du volume de l’échantillon et de la phase mobile environnante sont également importants pour la reconstruction de la forme des pics dans le nouveau système. Les tubulures de petite dimension peuvent contribuer à réduire la dispersion des pics devant et derrière la colonne. Des volumes plus importants améliorent le mélange de l’échantillon avant la colonne, ce qui a un effet positif sur les pics d’élution les plus précoces si le solvant de l’échantillon présente une force d’élution élevée.

Les volumes des cellules de flux des détecteurs sont importants lors du transfert d’une méthode, car tous les volumes influencent la dispersion des pics avant la détection. Le volume de la cellule de flux doit être faible par rapport au volume du pic et les réglages du détecteur doivent être cohérents et capables de projeter la forme appropriée.    

Impact des modes de chauffage

Le rôle de la thermostatisation ou du chauffage de la colonne et de la phase mobile est souvent sous-estimé pendant le transfert de méthode.

Les différents modes de chauffage de la colonne, tels que l’air calme et l’air forcé, ainsi que le chauffage de la pré-colonne, affectent différemment la sélectivité de la séparation en raison des gradients de température radiaux ou axiaux. Cet effet est particulièrement vrai pour les séparations à des pressions supérieures à 400 bars où le matériau de la colonne est chauffé par friction.

Impacts du volume de colonne supplémentaire

En veillant à ce que le volume de colonne supplémentaire (ECV) du nouvel instrument corresponde à celui du système d’origine, vous pourrez transférer les méthodes avec succès sans nouvelle validation.

Le volume de pré-colonne élargit le bouchon d’échantillon et lisse le gradient. Le volume post-colonne n’a d’incidence que sur l’élargissement de la bande de l’analyte. Les volumes pré- et post-colonne affectent les temps de rétention des analytes.

La variabilité des données est notamment plus prononcée dans les méthodes UHPLC que dans les méthodes HPLC. Veillez à tenir compte de la variation de l’ECV lors du transfert de méthode, en particulier lors du transfert d’une méthode établie entre différents modèles de systèmes et fabricants. 

Il ne faut pas négliger la complexité et la probabilité de rencontrer des problèmes de reproductibilité du temps de rétention et d’autres problèmes lors du transfert de méthodes. Afin d’éviter toute déconvenue, il convient d’analyser soigneusement les paramètres de la méthode, les caractéristiques du système et la compatibilité. Vous trouverez ci-dessous quelques ressources d'experts qui vous aideront à préparer le transfert de méthode et à résoudre les problèmes éventuels.

Le transfert de vos méthodes HPLC ou UHPLC d’un instrument à un autre ne doit pas être une source de stress. Cette vidéo vous donne des conseils d’experts et sur les bonnes pratiques que vous pouvez utiliser pour que le transfert de la méthode LC se fasse en douceur.

 
 
 
Foire aux questions

Qu’est-ce que le transfert de méthode en HPLC ?

Le transfert de méthode consiste à adapter une méthode d’analyse à un système LC différent. Les types classiques de transferts de méthodes comprennent la conversion de méthodes HPLC en méthodes UHPLC afin d’optimiser la vitesse et le débit. D’autres cas de figure impliquent le transfert d’une méthode validée du département de R&D au département des opérations ou à un laboratoire clinique.  

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