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Ensayos de microplacas de fluorescenciaSustratos, tampones y patrones de calibración para ensayos cinéticos o de punto final en diversas aplicaciones biológicas |
La combinación de la sensibilidad de los ensayos basados en fluorescencia y la comodidad del formato de microplacas permite a los investigadores lograr una lectura rápida y cuantitativa mediante el análisis de alto rendimiento. Dentro de un pocillo de microplaca, la señal fluorescente se puede generar con células intactas, lisados celulares o preparaciones de enzimas purificadas, y posteriormente cuantificable mediante la medición de la intensidad de fluorescencia emitida desde el pocillo sin necesidad de realizar una adquisición de imágenes celulares.
Hay disponible una gran variedad de ensayos de microplacas de fluorescencia, desde ensayos de viabilidad y proliferación celular hasta ensayos de actividad enzimática y cuantificación de proteínas. Estas herramientas ofrecen mediciones precisas y fiables para protocolos cinéticos y de criterio de valoración en una amplia gama de aplicaciones biológicas.
Aplicaciones de las microplacas de fluorescencia
Ensayos que detectan la activación de las enzimas de la caspasa, la etapa temprana de la apoptosis
Ensayos que detectan la activación de las enzimas de la caspasa, la etapa temprana de la apoptosis
Mida la actividad de varios analitos, como colesterol, fosfatos y pirofosfato, fosfatasa y fosfolipasa
Utilice diversos ensayos para evaluar la viabilidad, como la reducción o el potencial de redox, la liberación de proteínas enzimáticas o la integridad de la membrana
Ensayos para la medición de proteasa y otras enzimas como colagenasas, elastasas, lisozimas, transcriptasa inversa y ARN polimerasa dependiente de ARN
Ensayos y sustratos para la detección sensible de β-galactosidasa o glucosidasas
Realice un seguimiento del calcio y magnesio intracelular o mida el pH intracelular con una amplia gama de opciones de longitud de onda en células vivas
El sustrato Amplex Red se utiliza en varios ensayos metabólicos, de neurobiología e inflamación para detectar una variedad de analitos, como glucosa, galactosa, colesterol, ácido glutámico, xantina (o hipoxantina), ácido úrico, colina y acetilcolina, así como peróxido de hidrógeno
Ensayos para cuantificar el dsADN, el ssADN y el ARN para aplicaciones posteriores como secuenciación de última generación, transfección, PCR en tiempo real, experimentos con micromatrices, RT-PCR, visualización diferencial de PCR, Northern blot, ensayos de nucleasas S1, ensayos de protección de ARNasa y preparaciones de bibliotecas de ADNc
Kits de cuantificación específicos de componentes dentro de la muestra; por ejemplo, CBQCA es compatible con lipoproteínas o mezclas de proteínas lipídicas, mientras que NanoOrange es compatible con agentes reductores, y el ensayo Quant-iT es compatible con sales y disolventes pero no con detergentes
Detección de diversas especies reactivas de oxígeno (ROS), como el estrés oxidativo generalizado, el óxido nítrico (NO), la glutatión reducida (GSH) y la mieloperoxidasa (MPO)
Expertly detect fluorescence with Thermo Scientific plate readers
High-sensitivity fluorescence detection for 6-1,536 samples can be quickly performed on the Varioskan ALF or Varioskan LUX Multimode Microplate Reader using Invitrogen reagents to enable optimal detection. Take advantage of automatic dynamic range selection to get optimal gain settings for each individual well and automation capabilities for even higher throughput.
Instrucciones para realizar ensayos óptimos de microplacas basados en fluorescencia
- Seleccione los filtros o longitudes de onda de excitación y emisión de fluorescencia óptimos. La información sobre la longitud de onda de excitación y emisión se proporciona en el manual del producto o en las tarjetas de revisión rápida. Si las coincidencias espectrales entre los reactivos y los instrumentos de detección son deficientes, se pueden producir grandes pérdidas de la señal.
- Ajuste la sensibilidad del instrumento para maximizar la señal de fluorescencia. Para conseguir el máximo intervalo dinámico lineal, elija el parámetro más elevado de ganancia o sensibilidad que sea adecuado para los valores más altos y bajos previstos para el ensayo.
- Utilice volúmenes de ensayo uniformes. Las pequeñas diferencias en el volumen de ensayo pueden causar grandes diferencias en la señal. Para obtener mediciones fiables, utilice siempre el menor volumen mínimo recomendado por el fabricante del instrumento.
- Mezcle las muestras cuidadosamente. Una mezcla inadecuada puede provocar agregación, precipitación, variaciones en las tasas de reacción o diferencias en la concentración del analito o del reactivo de detección entre pocillos.
- Evite la formación de burbujas. Las burbujas de las soluciones de ensayo producen difusión de luz y señales erróneas. Centrifugue brevemente la microplaca, desgasifique las soluciones antes de la dispensación (pero no en los ensayos con células vivas) o rompa las burbujas grandes con una punta de pipeta.
- Prepare las muestras replicadas. El análisis de réplicas aumenta la precisión de las mediciones.
- Evite el «efecto de borde». Para determinar la consistencia de la señal de fluorescencia que se obtiene en los pocillos de la microplaca, se puede utilizar una solución de un fluoróforo con un espectro adecuado. Si se observan diferencias en la señal de los pocillos que se encuentran en los bordes de las microplacas, aplique un factor de calibración adecuado o evite utilizar esos pocillos.
- Separe las muestras brillantes. En las microplacas transparentes, las muestras muy fluorescentes pueden afectar a las señales que se observan en los pocillos colindantes (interferencia entre pocillos). Deje vacíos los pocillos situados junto a muestras muy fluorescentes o cargue las muestras con intensidades de fluorescencia similares en pocillos contiguos. Utilice microplacas de paredes blancas o negras en lugar de las transparentes.
- Evite el fotoblanqueo de las muestras. No vuelva a procesar las muestras a menos que sea absolutamente necesario. No vuelva a procesar los patrones, ya que algunos reactivos pueden producir fotoblanqueo considerable durante las mediciones de la fluorescencia.
- Utilice concentraciones de muestras que se encuentren dentro del intervalo del ensayo. Para muestras desconocidas, pruebe con varias diluciones.
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