バイオレットレーザー用高輝度色素

Invitrogen™ eBioscience™ Super Bright 色素は、蛍光ポリマーとそのタンデムに基づいた一連のフルオロフォアで、名前は発光波長に由来し、バイオレットレーザー (405 nm) により励起されます。これらの色素はフローサイトメトリーで使用するために最適化されており、この輝度により薄暗い集団の識別を改善できる可能性があります。Super Bright 抗体複合体により、マルチカラーパネル設計での選択肢が増え、バイオレットレーザーの有用性が広がります。


Super Bright 436 色素

Invitrogen™ eBioscience™ Super Bright 436 色素は、最大励起が 414 nm、発光ピークが 436 nm です。450/50 バンドパスフィルターまたはそれと同等のものが推奨されており、Invitrogen™ eFluor™ 450 色素または Invitrogen™ Pacific Blue™ 色素と同様です。Super Bright 436 色素複合抗体は、eFluor 450 色素複合抗体より著しく明るく、陽性および陰性集団の分解能が類似する Brilliant Violet™ 421複合体の代わりになります。安定性試験の結果、Super Bright 436 色素は、染色された細胞がホルムアルデヒド固定液に最大 3 日間さらされるか、カバーのない状態で周辺光に一晩放置された場合、蛍光の減少は最小限であることが示されました。

図 1.Super Bright 436 色素の性能比較。マウス骨髄細胞を、Anti-Ly-6A/E (clone D7) APC と、Super Bright 436 色素 (左パネル)、eFluor 450 色素 (中央パネル)、Brilliant Violet 421 色素 (右パネル) のいずれかと結合した 抗 CD117 (クローン 2B8) で染色しました。


Super Bright 600 色素

Invitrogen™ eBioscience™ Super Bright 600 色素はタンデム色素で、Super Bright 436 色素と 600 nm で発光するアクセプター色素で構成されています。この色素は 610/20 バンドパスフィルターを用いて検出可能です。このタンデムポリマー色素に結合した抗体は、 Brilliant Violet™ 605 色素複合体への輝度に匹敵します。Super Bright 600 色素に結合した抗体は、ホルムアルデヒド固定液で保存した場合、最大 3 日間安定です。  

Super Bright 600 色素を用いたマルチプレックス

図 2.マルチプレックスフローサイトメトリー実験。正常ヒト末梢血細胞は Super Bright 染色バッファーで希釈され、示された試薬で表面が染色されました。生細胞 (固定可能生存染色を用いて測定) を使って分析し、さまざまな T 細胞サブセットを識別しました。


Super Bright 645 色素

Invitrogen™ eBioscience™ Super Bright 645 色素はタンデム色素で、Super Bright 436 色素と 645 nm にピークを持つアクセプター色素で構成されています。この色素は 660/20 バンドパスフィルター、あるいはその同等のフィルターを用いて検出可能です。このタンデムポリマー色素に結合した抗体は、 Brilliant Violet™ 650 色素結合の抗体の輝度に匹敵し(図3)、また、他のバイオレットチャンネルへの漏れこみを最小限に抑えています。

Invitrogen eBioscience Super Bright 645 dye

図 3.Super Bright 645とBrilliant Violet 650の蛍光強度の比較
(A)マウスの脾臓細胞を抗マウスCD8a抗体-Super Bright 645(赤、Cat. No. 64-0081-82)と抗マウスCD8a抗体-Brilliant Violet 650(グレー)で染色した(抗体濃度は同じ)。
(B)ヒトPBMCを抗ヒトCD8a抗体-Super Bright 645(赤、Cat. No. 64-0088-42)と抗ヒトCD8a抗体-Brilliant Violet 650(グレー)で染色した(抗体濃度は同じ)。


Super Bright 702 色素

Invitrogen™ eBioscience™ Super Bright 702 色素はタンデム色素で、Super Bright 436 色素と 702 nm にピークを持つアクセプター色素で構成されています。この色素は 710/50 バンドパスフィルター、あるいはその同等のフィルターを用いて検出可能です。このタンデムポリマー色素に結合した抗体は、 Brilliant Violet™ 711 色素結合の抗体の輝度に匹敵し(図4)、また、Brilliant Violet™ 786チャンネルへの漏れこみを最小限に抑えています。

図 4.Super Bright 702とBrilliant Violet 711の蛍光強度の比較
(A)マウスの脾臓細胞を抗マウスCD4抗体-Super Bright 702(赤)と抗マウスCD4抗体-Brilliant Violet 711(グレー)で染色した(抗体濃度は同じ)。
(B)ヒトPBMCを抗ヒトCD19抗体-Super Bright 702(赤)と抗ヒトCD19抗体-Brilliant Violet 711(グレー)で染色した(抗体濃度は同じ)。


Super Bright 染色バッファー

他のポリマー色素と同様、複数の Super Bright 色素と結合した抗体が、同一実験で一緒に使われる場合、非特異的色素間の相互作用が生じる可能性があります。その現象が生じると、相互作用は予想外の集団シフトを引き起こす可能性があります。Super Bright 色素バッファー (Cat.No. SB-4400-42) を Super Bright 複合体の追加前に使用すると、この問題は緩和され、プロット内で想定された位置に集団が戻ります。Super Bright 色素を Brilliant Violet 色素など他のポリマー色素と組み合わせて使用する際、Super Bright 染色バッファーを使用することで、色素間の相互作用を最小限にできます。Super Bright 染色バッファーは、試験 あたり 5 µL で使用するように作られているため、カクテルを調製する際に便利です。

Super Bright 染色バッファーは非特異的相互作用を最小限にする

図 3.Super Bright 染色バッファーは非特異的ポリマー色素との相互作用を緩和します。(A) フローサイトメトリー染色バッファー (上の図) または Super Bright 染色バッファー (下の図) を、抗 CD8a (クローン RPA-T8) Super Bright 600 色素と抗 CD4 (クローン SK3) Super Bright 436 色素で染色する前に、ヒト末梢血細胞に追加しました。(B) フローサイトメトリー染色バッファー (上の図) または Super Bright 染色バッファー (下の図) を、抗 CD8a (クローン SK1) Brilliant Violet 605 色素と抗 CD4 (クローン SK3) Super Bright 436 色素で染色する前に、ヒト末梢血細胞に追加しました。(C) フローサイトメトリー染色バッファー (上の図) または Super Bright 染色バッファー (下の図) を、抗 CD8a (クローン RPA-T8) Super Bright 600 色素と抗 CD4 (クローン SK3) Brilliant Violet 421 色素で染色する前に、ヒト末梢血細胞に追加しました。

注文情報

色素 Super Bright 436 Super Bright 600
励起レーザー (nm) Violet
(405)
Violet
(405)
Em (nm) 436 600
推奨されるバンドパスフィルター 450/50 610/20
用途 フローサイトメトリー フローサイトメトリー
同等の色素 Brilliant Violet 421 Brilliant Violet 605
一次抗体 Super Bright 436 複合体 Super Bright 600 複合体
コントロール用抗体 Super Bright 436 複合体 Super Bright 600 複合体
Super Bright 染色バッファー (Cat.No. SB-4400-42) は、Super Bright ポリマー色素とともに使用することをお薦めします。

リソース

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