Click-iT® ラベリングテクノロジー

Clikc-iT®反応は、目的の分子を最初に標識し、その後にそれを検出するという2段階法での特異的結合部分として、アジドとアルキンを用います。 アジドとアルキンは、「click」反応において区別なく同じように用いることができるので、いずれもタグ付けされた基質として用いられ、または検出ステップ用にラベリングすることができます。

小さい標識

アジドとアルキンは、生体分子に組み込み可能な、不活性かつ安定した極小の成分です。これらは、ヌクレオチド、糖、またはアミノ酸にタグ付け可能であり、細胞内で機能し続け、核酸、複合多糖類、またはタンパク質に対して正常に結合する上で小さく有用です。

分子が小さいことで、以下のことが可能になります。

• 細胞ローディング時のダメージが小さい
• 生体分子への正常な取り込み

典型的なClick-iT®ラベリングステップでは、タグ付けされた分子内のアジドまたはアルキン部分が細胞に供給され、細胞内バイオポリマーに細胞が組み込まれます。

特異的検出

アジドとアルキンは、「click」反応において高い特異性をもって互いに結合し、安定かつ不活性な生成物を形成します。当社は両分子をAlexa Fluor®色素で蛍光標識し、複雑な試料を透過するのに十分なほど小さい高感度検出ツールとしました。

• 細胞ラベリング時のダメージが最小
• バックグラウンドシグナルが低い特異的検出

アジドが細胞タンパク質に組み込まれると、Alexa Fluor®色素によってタグ付けされたアルキンを用いてアジドを標識することができます。その逆に、アルキンが細胞タンパク質に組み込まれると、Alexa Fluor® 色素によってタグ付けされたアジドを用いてアジドを標識することができます。

変性ステップが最小限

銅触媒Click反応は、アルキンをアジドに連結させて安定かつ不活性な生成物を形成します。Click-iT® Plus試薬は、蛍光タンパク質の活性を保つので、検出においてGFPまたはR-PEによりClick反応をマルチプレックス化することができます。