SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix for qRT-PCR

Description

Le système SuperMix premier brin SuperScript® III pour qRT-PCR offre toutes les caractéristiques de la transcriptase inverse SuperScript® III en matière de capacités haute température dans un format SuperMix optimisé pour la synthèse de l’ADNc premeir brin, à des fins d’utilisation dans le cadre d’une RT-PCR quantitative (qRT-PCR) en temps réel. Une telle configuration de réaction simple et permettant de gagner du temps repose sur deux tubes uniquement : un tube 2X Reaction Mix et un tube Enzyme Mix.

Mélange enzymatique
La transcription inverse SuperScript® III, qui figure dans le mélange enzymatique RT, est une version de RT M-MLV qui a été conçue pour réduire l’activité de RNAse H et procurer une meilleure stabilité thermique L’enzyme peut être utilisée pour synthétiser l’ADNc à des températures s’échelonnant entre 42 et 60°C, offrant une meilleure spécificité, des rendements d’ADNc supérieurs et davantage de produit de pleine longueur que d’autres transcriptases inverses. Dans la mesure où la SuperScript® III RT n’est pas inhibée sensiblement par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert, elle permet de synthétiser de l’ADNc à partir de l’ARN total. L’inhibiteur de ribonucléase recombinant RNaseOUT™, qui figure également dans le mélange enzymatique, est une protéine bloquant la RNase, qui assure une protection contre la dégradation de l’ARN ciblé sous l’effet de la contamination de la préparation d’ARN par la ribonucléase.

Mélange réactionnel
Le mélange réactionnel 2X RT comporte de l’oligo(dT)₂₀, des hexamères aléatoires, du MgCl₂, ainsi que des dNTP, le tout dans une formule tampon optimisée pour la qRT-PCR. E. coli RNase H est fourni sous la forme d’un tube distinct au sein du kit en vue d’éliminer le modèle d’ARN de la molécule hybride d’ARN de l’ADNc après synthèse premier brin. Cette approche augmente la sensibilité dans le cadre de la qRT-PCR.

Utilisation du système SuperMix premier brin® III
Cette formulation SuperMix peut être utilisée pour quantifier un maximum de 10 copies d’un gène cible dans le cadre d’une qRT-PCR, avec une vaste échelle dynamique permettant la quantification précise des ARNm en forte concentration au sein d’un ARN total d’1 µg maximum. Des réactifs spécifiés pour 50 ou 250 réactions de transcription inverse de 20 µl chacun sont fournis.

Spécifications

Reverse Transcriptase:	SuperScript™ III
Downstream Application:	Real-Time Quantitative PCR (qPCR)
Reaction Format:	SuperMix or Master Mix
Sample Type (General):	RNA
Optimal Reaction Temperature:	50° C
Primer Type:	Oligo dT Primers, Random Primers
Product Line:	SuperScript™
Product Size:	50 reactions
Shipping Condition:	Dry Ice

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