SuperScript™ III Erststrang-Synthese SuperMix für qRT-PCR
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SuperScript™ III Erststrang-Synthese SuperMix für qRT-PCR

SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix für qRT-PCR bietet die hohe Temperaturbeständigkeit der SuperScript™ III Reverse Transkriptase in einem optimierten SuperMix-FormatWeitere Informationen
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KatalognummerAnzahl Reaktionen
1175205050 Reaktionen
11752250250 Reaktionen
Katalognummer 11752050
Preis (EUR)
856,65
Exklusiv online
902,00
Ersparnis 45,35 (5%)
Each
Anzahl Reaktionen:
50 Reaktionen
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Preis (EUR)
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SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix für qRT-PCR bietet die hohe Temperaturbeständigkeit der SuperScript™ III Reverse Transkriptase in einem optimierten SuperMix-Format für die Synthese der Erststrang-cDNA zur Verwendung in quantitativen Real-Time PCR (qRT-PCR). Der einfache, zeitsparende Reaktionsaufbau verwendet lediglich zwei Röhrchen: ein 2X Reaktionsgemisch und ein Enzymgemisch.

Das Enzymgemisch
Die im RT-Enzymgemisch enthaltene SuperScript™ III Reverse Transkriptase ist eine Version der M-MLV-RT, die zur Reduzierung der RNase H-Aktivität entwickelt wurde und eine höhere thermische Stabilität bietet. Das Enzym kann zur Synthese von cDNA bei Temperaturen von 42 – 60 °C verwendet werden und bietet eine bessere Spezifität, höhere cDNA-Ausbeute und mehr Produkt in voller Länge als andere reverse Transkriptasen. Da SuperScript™ III RT nicht signifikant von ribosomaler und Transfer-RNA gehemmt wird, kann sie für die Synthese von cDNA aus Gesamt-RNA verwendet werden. Der ebenfalls im Enzymgemisch enthaltene RNaseOUT™ Rekombinante Ribonuklease-Inhibitor ist ein RNase-Inhibitorprotein, das gegen den Abbau von Ziel-RNA aufgrund von Ribonuklease-Kontaminierung der RNA-Vorbereitung schützt.

Reaktionsgemisch
Das 2X RT-Reaktionsgemisch enthält Oligo(dT)20, Random-Hexamers, MgCl2 und dNTPs in einer Pufferformulierung, die für qRT-PCR optimiert wurde. E. coli RNase H wird als ein separates Röhrchen im Kit geliefert, um das RNA-Template aus dem cDNA:RNA-Hybridmolekül nach der Erststrang-Synthese zu entfernen. Dies führt nachweislich zur Erhöhung der Empfindlichkeit in qRT-PCR.

Verwendung von SuperScript™ III SuperMix für die Erststrang-Synthese
Diese SuperMix-Formulierung kann verwendet werden, um weniger als 10 Kopien eines Ziel-Gens in qRT-PCR mit einem breiten dynamischen Bereich, der eine genaue Quantifizierung von einer hohen Kopienzahl von mRNA von bis zu 1 µg der Gesamt-RNA unterstützt, zu quantifizieren. Reagenzien werden für 50 oder 250 RT-Reaktionen von je 20 µl angeboten.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications
EndprodukttypcDNA (Erststrang)
FormatMaster-Mix
Anzahl Reaktionen50 Reaktionen
Optimale Reaktionstemperatur50 °C
Menge50 Reaktionen
ReaktionsformatMaster Mix
ReagenztypReverse Transkription
Reverse TranskriptaseSuperScript III
VersandbedingungTrockeneis
AusgangsmaterialRNA
VerfahrenReverse Transkription
NachweisverfahrenPrimer-Sonde
Zur Verwendung mit (Anwendung)Real-Time PCR (qPCR)
GC-Rich PCR PerformanceHoch
Reaktionsgeschwindigkeit30 min
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung

• 2X-RT-Reaktionsgemisch (500 μl)
• RT-Enzymgemisch (100 μl)
E. coli RNase (50 μl)

Lagerung bei –20 °C.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

How long can I store the cDNA from my reverse transcription step?

You can store your cDNA at 2-6 degrees C for up to 24 hours. For long-term storage, store the cDNA at -15 to -25 degrees C and add EDTA to a final concentration of 1 mM to prevent degradation.

How can I remove genomic DNA contamination from my sample prior to performing RT-PCR?

We recommend using ezDNase (Cat. No. 11766051). ezDNase Enzyme's high specificity for double-stranded DNA enables efficient and fast genomic DNA removal without reduction in the quality or quantity of RNA. ezDNase Enzyme is heat-labile and so can be easily deactivated by heat treatment at moderate temperature (55 degrees C). These features make ezDNase Enzyme an excellent choice for genomic DNA removal prior to reverse transcription reactions.

How much RNA should be employed for first-strand cDNA synthesis?

The amount of RNA template for a cDNA synthesis is highly flexible and depends upon the amount of sample available and an individual's need. In general, 1 µg total RNA is used in a typical 20-µL RT reaction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within ourReverse Transcription and RACE Support Center.

Should I treat the cDNA with RNase H prior to downstream processing?

RNase H treatment is not always necessary. Many PCR reactions work without it. However, for cDNA synthesized with RNase H-deficient reverse transcriptases (like SuperScript II, III, and IV), RNA/cDNA hybrids—especially GC-rich ones—may not denature well, reducing PCR sensitivity. RNase H treatment can help in such cases. Additionally, RNase H treatment is beneficial for cloning larger fragments.

What percentage of RNA is converted to cDNA when performing reverse transcription?

This depends highly on the quality of the sample. mRNA itself makes up 1-5% of total RNA. Depending on the primer and enzyme used, reverse transcription can covert >70% of that into cDNA.

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Zitierungen und Referenzen (3)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
Simvastatin downregulates the expression of hepcidin and erythropoietin in HepG2 cells.
Authors:Chang CC, Chiu PF, Chen HL, Chang TL, Chang YJ, Huang CH
Journal:Hemodial Int
PubMed ID:22716163
'Statin therapy may improve responsiveness to erythropoietin-stimulating agents in patients with end-stage renal disease. Although statins increase hepatic iron uptake and storage capacity in cholestatic rats, the underlying mechanisms are unclear. Therefore, we examined the effects of a statin (simvastatin) on the expression of hepcidin, erythropoietin receptor (EPOR) and erythropoietin ... More
TDAG51 is an ERK signaling target that opposes ERK-mediated HME16C mammary epithelial cell transformation.
Authors:Oberst MD, Beberman SJ, Zhao L, Yin JJ, Ward Y, Kelly K,
Journal:BMC Cancer
PubMed ID:18597688
'INTRODUCTION: Signaling downstream of Ras is mediated by three major pathways, Raf/ERK, phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K), and Ral guanine nucleotide exchange factor (RalGEF). Ras signal transduction pathways play an important role in breast cancer progression, as evidenced by the frequent over-expression of the Ras-activating epidermal growth factor receptors EGFR and ... More
Reprogramming of mouse fibroblasts into cardiomyocyte-like cells in vitro.
Authors:Qian L, Berry EC, Fu JD, Ieda M, Srivastava D,
Journal:
PubMed ID:23722259
Cardiac fibroblasts can be reprogrammed to cardiomyocyte-like cells by the introduction of three transcription factors: Gata4, Mef2c and Tbx5 (collectively referred to here as GMT). Resident cardiac fibroblasts can be converted in vivo into induced cardiomyocyte-like cells (iCMs) that closely resemble endogenous cardiomyocytes and electrically integrate with the host myocardium. ... More