Enzima ezDNase™

La enzima DNAasa ez™ Invitrogen™ es una ADNasa específica bicatenaria recombinante para la eliminación rápida del ADN genómico contaminante deMás información

Número de catálogo	Cantidad
11766051	50 μl

Número de catálogo 11766051

Precio (USD)

Cantidad:

50 μl

Pedido a granel o personalizado

La enzima DNAasa ez™ Invitrogen™ es una ADNasa específica bicatenaria recombinante para la eliminación rápida del ADN genómico contaminante de las preparaciones de ARN. Escinde los enlaces fosfodiéster en el ADN bicatenario para producir oligonucleótidos de 2–8 pb con terminales 5’-fosfato y 3’-hidroxilo.

Las características de la enzima DNAasa ez son las siguientes:
• Eliminación rápida y eficiente del ADN genómico
• Especificidad alta sin impacto en el ARN, ADNc o cebadores en las reacciones de RT

La alta especificidad de la enzima DNAasa ez para el ADN bicatenario permite la eliminación rápida y eficiente del ADN genómico sin reducir la calidad o cantidad de ARN o ADN monocatenario presente en la reacción, como el ADNc y los cebadores. La enzima DNAasa ez es termolábil y, por lo tanto, puede desactivarse fácilmente mediante tratamiento térmico a temperatura moderada (55 °C). Estas características hacen de la DNAasa ez una opción superior para la eliminación de ADN genómico antes de las reacciones de transcripción inversa.

Cuando se usa en combinación con la mezcla maestra SuperScript™ IV VILO™ u otros reactivos de transcripción inversa Invitrogen, la enzima DNAasa ez ayuda a reducir significativamente la posibilidad de que la síntesis de ADNc se vea comprometida por el ADN genómico y reducir la variación en la cuantificación de RT-qPCR causada por la pérdida o daño del ARN durante el tratamiento convencional con la ADNasa.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Tampón compatibleReactivos de transcripción inversa

Para utilizar con (aplicación)Reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR)

Tipo de productoEnzima

Cantidad50 μl

Tipo de muestraARN

Condiciones de envíoEn hielo seco

Concentración10X

EnzimaADNasa

FormularioLíquido

Línea de productosDNAasa ez

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

• Enzima DNAasa ez, 50 μl
• Tampón de DNAasa ez (10X), 100 μl
• Agua sin nucleasas, 1,25 ml

Almacenar a una temperatura de entre -5 y -30 °C.

Preguntas frecuentes

How can I quantify the ssDNA in samples that contain both ssDNA and dsDNA, using the Qubit ssDNA Assay Kit (Cat. No. Q10212)?

Unfortunately, it is not possible to efficiently measure the ssDNA content in a sample that also contains dsDNA with the Qubit ssDNA Assay Kit (Cat. No. Q10212). The dye in the Qubit ssDNA Assay kit binds to both ssDNA and dsDNA.

It is possible to treat the sample with a DNase that only degrades dsDNA, such as theezDNase Enzyme (Cat. No. 11766051), and measure the ssDNA concentration afterward. However, if all dsDNA is not successfully digested, there is a risk of overestimating the ssDNA content.

The following article describes a PCR-based method to detect ssDNA in dsDNA samples:

Quantitative amplification of single-stranded DNA (QAOS) demonstrates that cdc13-1 mutants generate ssDNA in a telomere to centromere direction

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Does the TaqMan Cells-to-CT Express Kit contain reagents for the removal of genomic DNA (gDNA)?

Yes, the TaqMan Cells-to-CT Express Kit includes Express ezDNase which can be added to the Express Lysis Solution for removal of gDNA during cell lysis. Express ezDNase is a double-strand specific, heat-labile DNase that will only digest gDNA, making it compatible with the downstream reverse transcription reaction. The enzyme is automatically inactivated during a heat kill step included in the reverse transcription program. To avoid the detection of gDNA, we recommend using a TaqMan Gene Expression Assay specifically designed to span an intron-exon boundary. Such assays are designated with an "_m1" suffix. More information can be found here.

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In your SuperScript IV RT protocols, there is no ezDNase inactivation step. Will ezDNase be active to affect RNA or the RT reaction?

The Invitrogen ezDNase Enzyme is a novel DNase that is highly specific for double-stranded DNA. It has no activity on single-stranded DNA in RT reactions (primers or probes), or on RNA. The enzyme is also thermolabile—it is inactivated quickly at temperatures typical for the SuperScript IV RT reaction (e.g., 50 degrees C). The additional inactivation step is therefore not required for most RT-qPCR applications. If the RNA sample is to be used for RT-PCR of fragments ≥3 kb, incubate the sample for 5 minutes at 55 degrees C in the presence of 10 mM DTT to inactivate the enzyme.

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Which SuperScript IV RT format do you recommend for real-time PCR applications?

For RT-qPCR applications we recommend using the Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix (Cat. No. 11756050). The cDNA synthesis reaction setup with this master mix requires fewer pipetting steps and therefore reduces variation in the data. SuperScript IV RT, as a component of the master mix, offers the highest efficiency of cDNA synthesis step compared to competitors’ products.

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Are there any significant changes in the SuperScript IV RT protocol compared to the SuperScript III RT protocol?

The only difference is that the incubation time for the reverse transcription reaction has been reduced to 10 minutes and inactivation time has been reduced to 5 minutes at 85 degrees C.

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