SuperScript™ First-Strand Synthesis System for RT-PCR

      SuperScript™ First-Strand Synthesis System for RT-PCR

      Numéro de catalogue:  11904018

      Invitrogen™  Applications liées: Reverse Transcription

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      Description

      Le système de synthèse premier brin SuperScript® pour la RT-PCR est optimisé pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir de poly(A)+ purifié ou d’ARN total. Le système peut être utilisé avec une quantité aussi infime qu’1 ng ou aussi grande que 5 µg d’ARN total. Après la synthèse, l’ADNc peut être amplifié avec des amorces spécifiques par la PCR sans extraction organique intermédiaire ni précipitation à l’éthanol. En conjonction avec la PCR, le système peut être utilisé pour détecter la présence de messages rares, pour définir la quantité d’ARNm spécifique à partir d’un petit nombre de cellules, ou pour cloner des ADNc spécifiques sans construire une bibliothèque d’ADNc complète. Le système est souple et permet d’utiliser tous les enzymes de PCR. Associez-le à l’ADN polymérase AccuPrime™ Taq ou l’ADN polymérase Platinum® Taq pour une PCR plus spécifique ou à l’ADN polymérase AccuPrime™ Pfx pour les applications de clonage haute fidélité.

      SuperScript II RT
      La réaction de synthèse d’ADNc premier brin est catalysée par transcription inverse (RT) SuperScript® II Cette enzyme a été conçue pour réduire l’activité de RNase H qui détériore l’ARNm au cours de la réaction premier brin, ce qui a pour résultat une bien meilleure synthèse d’ADNc sur toute la longueur et des rendements plus élevés d’ADNc premeir brin que ce qui est obtenu avec RNase H+ RT. Dans la mesure où la SuperScript® II RT n’est pas inhibée sensiblement par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert, elle peut être utilisée efficacement pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir d’une préparation d’ARN total. L’enzyme démontre une stabilité thermique accrue et peut être utilisée à des températures pouvant atteindre 50°C.

      Utilisation du système de synthèse premier brin SuperScript® pour la RT-PCR
      Ce système a été optimisé pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir de quantités variables de matériaux de départ. La concentration de SuperScript® II RT a été diminuée et l’inhibiteur de RNase recombinante RNaseOUT™ a été ajouté au système dans le cadre de ce processus d’optimisation. En outre, les conditions de réaction ont été modifiées pour augmenter encore plus la sensibilité du système. À l’aide du kit, vous synthétisez l’ADNc premier brin soit avec de l’ADN total soit avec de l’ARN total ou ARN sélectionné par poly(A)+ amorcé avec de l’oligo(dT), des amorces aléatoires ou une amorce spécifiquement génétique. Ensuite, vous exécutez la PCR dans un tube séparé avec des amorces spécifiques pour le gène d’intérêt.
      For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

      Spécifications

      Reverse Transcriptase: SuperScript™ II
      Downstream Application: Reverse Transcriptase PCR (RT-PCR)
      Reaction Format: Separate Components
      Optimal Reaction Temperature: 42° C
      Primer Type: Oligo dT Primers, Random Primers
      Product Line: SuperScript™
      Product Size: 50 reactions
      Shipping Condition: Wet Ice

      Contenu et stockage

      Components:
      • 50 µl Oligo(dT)12-18 (0.5 µg/µl)
      • 250 µl Random hexamers (50 ng/µl)
      • 1 ml 10X RT buffer
      • 500 µl 25 mM Magnesium Chloride
      • 250 µl 0.1 M DTT
      • 250 µl 10 mM dNTP mix
      • 50 µl SuperScript™ II RT (50 U/µl)
      • 100 µl RNaseOUT™ (40 U/µl)
      • 50 µl E. coli RNase H (2 U/µl)
      • 1.2 ml DEPC-treated water
      • 15 µl Control RNA (50 ng/µl)
      • 20 µl Control Primer A (10 µM)
      • 20 µl Control Primer B (10 µM)

      Store at -20°C.

      Documents

      Manuels et protocoles

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