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Milieu d’expression FreeStyle™ 293
Milieu d’expression FreeStyle™ 293
Citations et références (6)
Gibco™

Milieu d’expression FreeStyle™ 293

Le milieu d’expression FreeStyle™ 293 est un milieu de culture défini chimiquement, sans composants d’origine animale et sans protéines. IlAfficher plus
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RéférenceQuantité
123380181 L
123380266 x 1 L
123380011 sachet universel
1233800220 L
Référence 12338018
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Le milieu d’expression FreeStyle™ 293 est un milieu de culture défini chimiquement, sans composants d’origine animale et sans protéines. Il a été spécifiquement développé pour encourager la croissance et la transfection des cellules 293-F en suspension sans adaptation. Le milieu est complet et prêt à l’emploi, sans supplémentation requise. Caractéristiques du milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 :

• Format complet et prêt à l’emploi contenant le supplément GlutaMAX™
• Capacité à soutenir la croissance en suspension et la transfection des cellules 293-F
• Formulation définie chimiquement, sans composants d’origine animale et sans protéines
• Utilisation facile avec les systèmes d’expression FreeStyle™ 293
• Évolutivité dans des flacons rotatifs et des bioréacteurs

dFormat complet et prêt à l’emploi contenant le supplément GlutaMAX™
Le milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 est facile à utiliser. L’ajout de sérum, glutamine ou surfactants est inutile. ™™ Le milieu d’expression Gibco FreeStyle 293 contient ™ un supplément GlutaMAX pour minimiser l’accumulation d’ammoniac toxique et améliorer la viabilité et la croissance des cellules dans un format facile à utiliser.

La possibilité de soutenir la croissance en suspension et la transfection de cellules 293-F
Les™™ cellules Gibco 293-F, 293-H et FreeStyle 293-F en suspension peuvent être cultivées directement dans™™ le milieu d’expression Gibco FreeStyle 293 sans adaptation. Les cellules habituées à d’autres milieux sans sérum disponibles sur le marché peuvent être repiquées directement dans le milieu de culture d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293, généralement sans qu’il y ait besoin d’adaptation. En règle générale, les cellules nécessitent une adaptation lorsqu’elles proviennent de formulations contenant du sérum. Les cellules cultivées dans le milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 peuvent être transfectées à l’aide de réactifs de transfection à base de lipides, tels que le réactif 293fectin™ et le réactif Freestyle™ MAX.

Formulation définie chimiquement, sans composants d’origine animale et sans protéines
Le milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 est un milieu de culture défini chimiquement, sans composants d’origine animale et sans protéines. Il simplifie la purification de la protéine qui vous intéresse. Le milieu Gibco™ défini chimiquement ne contient aucune protéine, aucun hydrolysat et aucun composant de composition inconnue.

Utilisation facile dans les systèmes d’expression FreeStyle™ 293 et FreeStyle™ MAX pour produire des protéines
Le système d’expression FreeStyle™ 293 est un système complet de culture cellulaire en suspension pour générer de grandes quantités de protéines recombinantes de mammifère (voir la figure). Le système d’expression FreeStyle™ 293 associe le milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 au réactif 293fectin™, une formulation de lipides cationiques conçue pour transfecter les cellules FreeStyle™ 293-F en suspension à efficacité élevée. Le système d’expression FreeStyle™ MAX est un système technologique de pointe permettant de générer de grandes quantités de protéines de mammifère rapidement et à haut débit. Le système d’expression FreeStyle™ MAX associe le milieu Gibco™ FreeStyle™, le réactif FreeStyle™ MAX et soit les cellules FreeStyle™ CHO-S, soit les cellules FreeStyle™ 293-F.

Évolutivité dans des flacons rotatifs et des bioréacteurs
La production des protéines à l’aide du milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 peut être effectuée a plus grande échelle dans des flacons rotatifs ou des bioréacteurs. La vitesse appropriée de la centrifugation ou de la turbine, ainsi que la densité de l’ensemencement doivent être optimisées pour chaque système. Selon la conception et la vitesse de la turbine, l’ajout d’une quantité supplémentaire de Pluronic™ F-68 au milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 pourrait s’avérer nécessaire afin d’éviter toute tension de cisaillement au niveau de la culture.

Conditionnement dans des poches universelles
Les poches universelles Gibco™ sont suffisamment flexibles pour vous permettre de combiner un récipient gros volume pour milieu de culture à usage unique avec tout un éventail d’instruments de culture de cellules automatisés, de systèmes à bioréacteur à usage unique et de processus de connexion stériles, limitant ainsi la nécessité de recourir à des configurations personnalisées onéreuses.

Utilisation des produits
Les clients qui utilisent le milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 dans un procédé de fabrication, ayant soumis une demande à la FDA, peuvent nous réclamer une lettre d’autorisation pour référencer le Drug Master File (DMF) de type II

Fabrication et système de qualité conformes aux BPFa
Le milieu d’expression Gibco™ FreeStyle™ 293 est fabriqué sur un site conforme aux BPFa situé à Grand Island, New York. Ce site est homologué par la FDA comme fabricant de dispositifs médicaux et il est certifié ISO 13485.
À des fins de recherche ou de commercialisation avancée Non destiné aux diagnostics ou à l’administration directe à des humains ou des animaux.
Spécifications
Lignée cellulaireFreeStyle™ 293-F Cells
Gamme de produitsFreestyle
Type de produitMilieu d’expression
Quantité1 L
Conditions d’expéditionTempérature ambiante
ClassificationAucun composant d’origine animale, Défini chimiquement, Sans protéines, Sans sérum
Culture TypeCulture cellulaire en suspension
FormeLiquide
Serum LevelSans sérum
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Conditions de stockage : 2-8°C. À l’abri de la lumière.
Conditions d’expédition : Température ambiante
Durée de conservation : 12 mois à compter de la date de fabrication

Foire aux questions (FAQ)

Can I load the FreeStyle 293 Expression Medium or FreeStyle CHO Expression Medium directly onto a nickel column for His-tagged protein purification?

With FreeStyle 293 Expression Medium, we would recommend harvesting the cells a little earlier to reduce any nonspecific binding by host cell proteins and then filtering the culture supernatant through a 0.2 or 0.1 µM membrane before loading onto the column. On the other hand, FreeStyle CHO Expression Medium contains EDTA that will strip the nickel column. The medium can be subjected to dialysis or buffer exchange prior to loading on the column, or the EDTA can be chelated by adding 1-3 mg/L NiSO4 or NiCl to the supernatant. Iron or cobalt salts can also be used.

Can FreeStyle 293-F cells grown in FreeStyle 293 expression medium be transfected with ExpiFectamine293 Reagent along with enhancers? Is so, will the transfection efficiency be higher than that with FreeStyle Max Reagent?

You should be able to use the ExpiFectamine293 Reagent for transfection of Freestyle 293-F cells grown in FreeStyle 293 Expression Medium; however, the enhancers will provide only a little boost in expression as they are designed to work with higher density cultures that FreeStyle 293 Expression Medium cannot support.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Transfection Support Center.

Are there any recommendations for preventing or dispersing cell clumps in a suspension culture?

When cells meant to be grown in suspension are grown in static culture, they may form clumps. These clumps will severely limit transfection efficiency and protein expression. It is suggested that FreeStyle 293 cells in FreeStyle media and CHO-S cells in CD-CHO or CHO-SFM are grown in agitated suspension to reduce the appearance of clumps. However, if clumps do form, you can try the following protocol to select for cells that don't form clumps:

- Transfer cells into an appropriate size centrifuge tube that will hold the entire cell suspension.
- Allow cells to sit undisturbed for about 5 minutes. The time can vary depending on the specific cell line. Larger cell clumps will settle to the bottom of the tube.
- Collect cells from the upper portion of the tube to passage into a new flask.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Culture Support Center.

Is it necessary to grow FreeStyle 293-F cells in 8% CO2 when using the FreeStyle 293 Expression Medium? If 8% CO2 cannot be arranged, can I supplement the media with an additional reagent?

Our recommendation of 8% CO2 for the optimal growth of Freestyle 293 cells in Freestyle 293 Expression Medium is based on the bicarbonate content in the media and growth conditions of the cells observed by R&D. That said, you may use lower concentrations of CO2 if necessary (5% is common) to grow these cells. You may observe slightly slower growth kinetics or lower cell concentrations, but functionally the entire system will still work.

Does FreeStyle 293 Expression Medium contain any components that would interfere with concentrating secreted proteins from HEK 293 cells via ammonium sulfate precipitation?

Yes, the FreeStyle 293 Expression Medium contains Pluronic F-68 and lipids that would interfere with ammonium sulfate precipitation. Dialysis or tangential flow filtration can be used to remove lipids and Pluronic F-68 from the medium. Then you can concentrate the medium with ammonium sulfate.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Culture Support Center.

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Citations et références (6)

Citations et références
Abstract
Molecular dissection of the alpha-dystroglycan- and integrin-binding sites within the globular domain of human laminin-10.
Authors:Ido H, Harada K, Futaki S, Hayashi Y, Nishiuchi R, Natsuka Y, Li S, Wada Y, Combs AC, Ervasti JM, Sekiguchi K,
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:14701821
'The adhesive interactions of cells with laminins are mediated by integrins and non-integrin-type receptors such as alpha-dystroglycan and syndecans. Laminins bind to these receptors at the C-terminal globular domain of their alpha chains, but the regions recognized by these receptors have not been mapped precisely. In this study, we sought ... More
Transient transfection factors for high-level recombinant protein production in suspension cultured mammalian cells.
Authors:Liu C, Dalby B, Chen W, Kilzer JM, Chiou HC,
Journal:Mol Biotechnol
PubMed ID:18327552
'The efficient transfection of cloned genes into mammalian cells system plays a critical role in the production of large quantities of recombinant proteins (r-proteins). In order to establish a simple and scaleable transient protein production system, we have used a cationic lipid-based transfection reagent-FreeStyle MAX to study transient transfection in ... More
Biological activity of follistatin isoforms and follistatin-like-3 is dependent on differential cell surface binding and specificity for activin, myostatin, and bone morphogenetic proteins.
Authors:Sidis Y, Mukherjee A, Keutmann H, Delbaere A, Sadatsuki M, Schneyer A,
Journal:Endocrinology
PubMed ID:16627583
Follistatin (FST) and FST-like-3 (FSTL3) are activin-binding and neutralization proteins that also bind myostatin. Three FST isoforms have been described that differ in tissue distribution and cell-surface binding activity, suggesting that the FST isoforms and FSTL3 may have some nonoverlapping biological actions. We produced recombinant FST isoforms and FSTL3 and ... More
Mutation of key residues of RPE65 abolishes its enzymatic role as isomerohydrolase in the visual cycle.
Authors:Redmond TM, Poliakov E, Yu S, Tsai JY, Lu Z, Gentleman S,
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:16150724
RPE65 is essential for isomerization of vitamin A to the visual chromophore. Mutations in RPE65 cause early-onset blindness, and Rpe65-deficient mice lack 11-cis-retinal but overaccumulate alltrans-retinyl esters in the retinal pigment epithelium (RPE). RPE65 is proposed to be a substrate chaperone but may have an enzymatic role because it is ... More
T cell immunoglobulin mucin-3 crystal structure reveals a galectin-9-independent ligand-binding surface.
Authors:Cao E, Zang X, Ramagopal UA, Mukhopadhaya A, Fedorov A, Fedorov E, Zencheck WD, Lary JW, Cole JL, Deng H, Xiao H, Dilorenzo TP, Allison JP, Nathenson SG, Almo SC,
Journal:Immunity
PubMed ID:17363302
The T cell immunoglobulin mucin (Tim) family of receptors regulates effector CD4(+) T cell functions and is implicated in autoimmune and allergic diseases. Tim-3 induces immunological tolerance, and engagement of the Tim-3 immunoglobulin variable (IgV) domain by galectin-9 is important for appropriate termination of T helper 1-immune responses. The 2 ... More
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