SuperScript™ III One-Step RT-PCR System mit Platinum™ Taq High Fidelity DNA-Polymerase
SuperScript&trade; III One-Step RT-PCR System mit Platinum&trade; <i>Taq</i> High Fidelity DNA-Polymerase
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SuperScript™ III One-Step RT-PCR System mit Platinum™ Taq High Fidelity DNA-Polymerase

Das SuperScript III Ein-Schritt-RT-PCR-System mit Platinum Taq, hohe Wiedergabetreue, ist für die Endpunktdetektion und -analyse von RNA-Molekülen per Ein-Schritt-RT-PCR konzipiert.Weitere Informationen
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KatalognummerAnzahl Reaktionen
12574035100 Reaktionen
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Das SuperScript III Ein-Schritt-RT-PCR-System mit Platinum Taq, hohe Wiedergabetreue, ist für die Endpunktdetektion und -analyse von RNA-Molekülen per Ein-Schritt-RT-PCR konzipiert. Das System besteht aus zwei Hauptkomponenten: SuperScript III RT/Platinum Taq-Enzymgemisch, hohe Wiedergabetreue, und 2x Reaktionsgemisch. Das Enzymgemisch kombiniert SuperScript III reverse Transkriptase und Platinum Taq-DNA-Polymerase mit hoher Wiedergabetreue, eine Enzymmischung, die aus rekombinanter Taq-DNA-Polymerase, Pyrococcus-Spezies-GB-D-Polymerase und Platinum Taq-Antikörpern besteht, die die Polymeraseaktivität bei Umgebungstemperatur blockieren und eine Heißstart-PCR ermöglichen. Der 2X Reaction Mix besteht aus einem proprietären Puffersystem, optimiert für die reverse Transkription und die PCR-Amplifikation, für den universellen Einsatz optimierten Mg2+, Desoxyribonukleotidtriphosphaten und Stabilisatoren. Alle Komponenten für die cDNA-Synthese und PCR werden in einem einzigen Röhrchen mit genspezifischen Primern und Target-RNA kombiniert. Die reverse Transkription folgt automatisch nach dem PCR-Zyklus ohne zusätzliche Schritte. Das System kann einen breiten Bereich von RNA-Targets (bis zu 10 kb Länge) in variablen Konzentrationen (1 pg bis 1 µg Gesamt-RNA) nachweisen.

Hinweis: Für eine hervorragende Ein-Schritt-RT-PCR-Leistung empfehlen wir das SuperScript IV Ein-Schritt-RT-PCR-System oder das SuperScript IV Ein-Schritt-RT-PCR-System mit ezDNase. Das SuperScript IV Ein-Schritt-RT-PCR-System kombiniert die hohe Prozessivität von SuperScript IV reverse Transkriptase mit der hohen Wiedergabetreue der Platinum SuperFi DNA-Polymerase, um in kürzerer Zeit und für einen breiteren Zielbereich eine hervorragende Produktausbeute, Spezifität und Empfindlichkeit zu bieten, selbst bei nicht optimal aufgereinigten RNA-Proben.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
EndprodukttypPCR-amplifizierte cDNA
FormatKit
Hot-StartIntegrierter Heißstart
Anzahl Reaktionen100 Reaktionen
Optimale Reaktionstemperatur50 °C
PolymerasePlatinum Taq High Fidelity
Menge100 Reaktionen
ReaktionsformatReaktionsgemisch
ReagenztypReverse Transkription
Reverse TranskriptaseSuperScript III
Ribonuklease-H-AktivitätKeine
VersandbedingungTrockeneis
Größe (Endprodukt)Bis 10 kb
AusgangsmaterialRNA
Verfahren1-Step-RT-PCR
NachweisverfahrenPrimer-Sonde
GC-Rich PCR PerformanceHoch
PCR-Methode1-Schritt-RT-qPCR
Reaktionsgeschwindigkeit30 min
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung

• Superscript III RT/Platinum Taq High Fidelity Enzymgemisch (100 μl)
• 2X-Reaktionsgemisch (3x 1 ml)
• 5 mM Magnesiumsulfat (500 μl)

Alle Komponenten bei –30 °C bis –10 °C lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

How can I remove genomic DNA contamination from my sample prior to performing RT-PCR?

We recommend using ezDNase (Cat. No. 11766051). ezDNase Enzyme's high specificity for double-stranded DNA enables efficient and fast genomic DNA removal without reduction in the quality or quantity of RNA. ezDNase Enzyme is heat-labile and so can be easily deactivated by heat treatment at moderate temperature (55 degrees C). These features make ezDNase Enzyme an excellent choice for genomic DNA removal prior to reverse transcription reactions.

How much RNA should be employed for first-strand cDNA synthesis?

The amount of RNA template for a cDNA synthesis is highly flexible and depends upon the amount of sample available and an individual's need. In general, 1 µg total RNA is used in a typical 20-µL RT reaction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within ourReverse Transcription and RACE Support Center.

Should I treat the cDNA with RNase H prior to downstream processing?

RNase H treatment is not always necessary. Many PCR reactions work without it. However, for cDNA synthesized with RNase H-deficient reverse transcriptases (like SuperScript II, III, and IV), RNA/cDNA hybrids—especially GC-rich ones—may not denature well, reducing PCR sensitivity. RNase H treatment can help in such cases. Additionally, RNase H treatment is beneficial for cloning larger fragments.

What percentage of RNA is converted to cDNA when performing reverse transcription?

This depends highly on the quality of the sample. mRNA itself makes up 1-5% of total RNA. Depending on the primer and enzyme used, reverse transcription can covert >70% of that into cDNA.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Reverse Transcription and RACE Support Center.

I'm setting up my RT reaction and am trying to decide whether I should use random primers, oligo(dT) primer, gene-specific primer, or oligo(dT)/random mix primers. What would you suggest?

Random primers are the best choice for degraded RNA, RNA with heavy secondary structure, non-polyadenylated RNA, or prokaryotic RNA. It is recommended only for two-step RT-PCR, and typically gives the highest yields, although the cDNA may not necessarily be full length. Oligo(dT) primers are good to use when trying to recover full-length cDNA from 2-step RT-PCR. The reaction is influenced by secondary structure and RNA quality. Gene specific primers should be used for very specific, mainly one-step RT-PCR reactions.

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Zitierungen und Referenzen
Abstract
Transcription precedes loss of Xist coating and depletion of H3K27me3 during X-chromosome reprogramming in the mouse inner cell mass.
Authors:Williams LH, Kalantry S, Starmer J, Magnuson T,
Journal:Development
PubMed ID:21471155
'Repression of Xist RNA expression is considered a prerequisite to reversal of X-chromosome inactivation (XCI) in the mouse inner cell mass (ICM), and reactivation of X-linked genes is thought to follow loss of Xist RNA coating and heterochromatic markers of inactivation, such as methylation of histone H3. We analyzed X-chromosome ... More
Influenza A virus molecular virology techniques.
Authors:Zhou B, Wentworth DE,
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:22528160
Molecular biological techniques for genomic analysis and for creation of recombinant viruses are critical tools in our efforts to understand and combat influenza A viruses. These molecular virology approaches are used in diagnostics, basic research, molecular epidemiology, bioinformatics, and vaccine development. The majority of the techniques used to study this ... More