AcTEV™-Protease
AcTEV™-Protease
Zitierungen und Referenzen (6)
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AcTEV™-Protease

AcTEV™ Protease erkennt spezifisch eine Sequenz von sieben Aminosäuren (Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly, spaltet zwischen Gln und Gly), sodass diese zum Entfernen vonWeitere Informationen
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125750151000 E
Katalognummer 12575023
Preis (EUR)
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AcTEV™ Protease erkennt spezifisch eine Sequenz von sieben Aminosäuren (Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly, spaltet zwischen Gln und Gly), sodass diese zum Entfernen von Affinitätstags von Fusionsproteinen nützlich ist. AcTEV™ Protease ist eine verbesserte Version der Tobacco Etch Virus(TEV)-Protease und ist äußerst spezifisch, sehr aktiv und deutlich stabiler als native TEV-Protease, was zu verbesserter langfristiger Aktivität führt. Merkmale der AcTEV™ Protease:

• Hochspezifische Spaltungsaktivität
• Verbesserte Enzymstabilität für verlängerte Proteaseaktivität (siehe Abbildung)
• Aktivität über einen breiten Temperaturbereich (+4 °C bis 30 °C) und einen pH-Wert (6,0 bis 8,5) hinweg
• Sequenz aus 6-mal-Histidin zur einfacheren Entfernung aus der verdauten Proteinprobe
• Einzelbanden-Reinheit größer als 85 % ohne Kontamination durch unspezifische Protease

Anwendungen
Inkubation mit AcTEV™ Protease setzt das Protein von Interesse aus dem Fusionstag frei. Dies ist eine wirksame Methode zum Entfernen von Tags für Löslichkeit, Sekretion, Erkennung und Aufreinigung von rekombinanten Proteinen.

Enzymspezifikationen
Von E. coli aufgereinigt, das das AcTEV™ Protease-Gen exprimiert.

Definition der Einheit
Eine Einheit der AcTEV™ Protease spaltet 85 % eines 3 µg-Substrats in 1 h bei 30 °C.

Einheiten-Reaktionsbedingungen
50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 0,5 mM EDTA 1 mM DTT, 3 µg Kontrollsubstrat, und 1 Einheit Enzym in 30 µl für 1 Stunde bei 30 °C. AcTEV™ Protease wird funktional auf die Abwesenheit von unspezifischer Proteaseaktivität getestet.
Nur für Forschungszwecke. Darf nicht für diagnostische Verfahren eingesetzt werden.
Specifications
Kompatibler PufferTEV-Puffer
ProdukttypProtease
Menge10.000 U
VersandbedingungTrockeneis
Konzentration1.000 Einheiten
EnzymTEV-Protease
Optimale Reaktionstemperatur+4 bis 30 °C.
ProduktlinieAcTEV
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
AcTEV™ Protease wird mit einem Fläschchen mit 20X TEV-Puffer (1 M Tris-HCl, pH 8,0; 10 mM EDTA) und einem Fläschchen mit 100 mM DTT geliefert.
Bei -20 °C aufbewahren. Bei ordnungsgemäßer Lagerung garantiert 1 Jahr lang stabil.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

Why does AcTEV Protease require DTT?

A final concentration of 1 mM DTT is required for the AcTEV protease reaction. The DTT serves as a stabilizer of secondary structure, i.e., it ensures that the enzyme does not undergo oxidation. If you are unable to use DTT due to a column purification after digestion, you can leave it out and still see a successful AcTEV digestion, however we recommend using it.

No rigorous quantitative data for activity in the absence of DTT and EDTA has been collected in-house. Incubations using reaction buffer +/-DTT and +/- EDTA; have been performed, but the products were analyzed only at t=0 and t=2 hr at 30 degrees C. No difference in the amount of product generated +/-DTT or +/-EDTA was noticed, but it is possible that the detailed kinetics in a time course reaction may be a little different.

What is the cleavage recognition site for AcTEV Protease?

The recognition site for AcTEV Protease is ENLYFQS/G

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

What products do you offer for enzymatic cleavage of fusion tags from recombinant proteins?

We offer the following products:

-AcTEV Protease (Cat. Nos. 12575015, 12575023)
-EKMax Enterokinase (Cat. Nos. E18001, E18002)
-SUMO Protease (Cat. No. 12588018)


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Zitierungen und Referenzen (6)

Zitierungen und Referenzen
Abstract
Structure and function of an irreversible agonist-ß(2) adrenoceptor complex.
Authors:Rosenbaum DM, Zhang C, Lyons JA, Holl R, Aragao D, Arlow DH, Rasmussen SG, Choi HJ, Devree BT, Sunahara RK, Chae PS, Gellman SH, Dror RO, Shaw DE, Weis WI, Caffrey M, Gmeiner P, Kobilka BK,
Journal:Nature
PubMed ID:21228876
'G-protein-coupled receptors (GPCRs) are eukaryotic integral membrane proteins that modulate biological function by initiating cellular signalling in response to chemically diverse agonists. Despite recent progress in the structural biology of GPCRs, the molecular basis for agonist binding and allosteric modulation of these proteins is poorly understood. Structural knowledge of agonist-bound ... More
Quantitative reactivity profiling predicts functional cysteines in proteomes.
Authors:Weerapana E, Wang C, Simon GM, Richter F, Khare S, Dillon MB, Bachovchin DA, Mowen K, Baker D, Cravatt BF,
Journal:Nature
PubMed ID:21085121
'Cysteine is the most intrinsically nucleophilic amino acid in proteins, where its reactivity is tuned to perform diverse biochemical functions. The absence of a consensus sequence that defines functional cysteines in proteins has hindered their discovery and characterization. Here we describe a proteomics method to profile quantitatively the intrinsic reactivity ... More
Widespread bidirectional promoters are the major source of cryptic transcripts in yeast.
Authors:Neil H, Malabat C, d'Aubenton-Carafa Y, Xu Z, Steinmetz LM, Jacquier A,
Journal:Nature
PubMed ID:19169244
'Pervasive and hidden transcription is widespread in eukaryotes, but its global level, the mechanisms from which it originates and its functional significance are unclear. Cryptic unstable transcripts (CUTs) were recently described as a principal class of RNA polymerase II transcripts in Saccharomyces cerevisiae. These transcripts are targeted for degradation immediately ... More
Non-muscle myosin IIA is a functional entry receptor for herpes simplex virus-1.
Authors:Arii J, Goto H, Suenaga T, Oyama M, Kozuka-Hata H, Imai T, Minowa A, Akashi H, Arase H, Kawaoka Y, Kawaguchi Y,
Journal:Nature
PubMed ID:20944748
Herpes simplex virus-1 (HSV-1), the prototype of the a-herpesvirus family, causes life-long infections in humans. Although generally associated with various mucocutaneous diseases, HSV-1 is also involved in lethal encephalitis. HSV-1 entry into host cells requires cellular receptors for both envelope glycoproteins B (gB) and D (gD). However, the gB receptors ... More
Hexameric assembly of the proteasomal ATPases is templated through their C termini.
Authors:Park S, Roelofs J, Kim W, Robert J, Schmidt M, Gygi SP, Finley D,
Journal:Nature
PubMed ID:19412160
Substrates of the proteasome are recognized and unfolded by the regulatory particle, and then translocated into the core particle (CP) to be degraded. A hetero-hexameric ATPase ring, containing subunits Rpt1-6, is situated within the base subassembly of the regulatory particle. The ATPase ring sits atop the CP, with the Rpt ... More
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