CIAP (fosfatasa alcalina intestinal de ternera), 20 U/μl
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CIAP (fosfatasa alcalina intestinal de ternera), 20 U/μl

La fosfatasa alcalina intestinal bovina (CIAP) es una fosfomonoesterasa que elimina los fosfatos 3´ y 5´ del ADN y elMás información
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Número de catálogoCantidad
180090191000 U
Número de catálogo 18009019
Precio (MXN)
-
Cantidad:
1000 U
Pedido a granel o personalizado
La fosfatasa alcalina intestinal bovina (CIAP) es una fosfomonoesterasa que elimina los fosfatos 3´ y 5´ del ADN y el ARN.

Concentración: 20 unidades/µl

Aplicaciones:
Desfosforilación de fosforilada de extremo 5´ de ADN vectorial para prevenir la autoligación (1). Desfosforilación extremo 5 de ácidos nucleicos´ antes de la reacción directa con quinasa.

Fuente: Purificado de la mucosa intestinal bovina.

Pruebas de rendimiento y calidad:
Ensayos de endodesoxirribonucleasa, 3´ exodesoxirribonucleasa y ribonucleasa; eficiencia de desfosforilación medida en un ensayo de transformación.

Definición de unidad:
Una unidad hidroliza 1 µmol de fosfato de 4-nitrofenil en 1 min a 37 °C.

Condiciones de reacción de la unidad:
Tampón de 1 m de dietanolamina, 10 mm de fosfato 4-nitrofenil, 0,25 mm de MgCl 2 (pH 9,8) en 900 µl durante 10 min. a 37 °C.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de productoFosfatasa alcalina
Cantidad1000 U
Condiciones de envíoAprobado para su envío en hielo húmedo o seco
Concentración20 U/μl
EnzimaCIP
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
La fosfatasa alcalina intestinal bovina (20 unidades/μl) se suministra con un vial de tampón de desfosforolización 10X (500 mM de Tris-HCl [pH de 8,5], 1 mM de EDTA), vial de tampón de dilución (50 % de glicerol, 25 mM de Tris-HCl [pH de 7,6], 1 mM de MgCl2 y 0,1 mM de ZnCl2). Almacenar la fosfatasa alcalina intestinal de ternera a - 20 °C.

Preguntas frecuentes

What other enzymes besides ligase may I need to perform restriction cloning?

Dephosphorylating the vector to decrease background can be achieved with:
Heat Inactivated Alkaline Phosphatase, or Calf Intestinal Alkalline Phosphatase (available as 1 unit/µL or 20 units/µL)

If you need to create blunt phosphorylated DNA ends (“polishing” the ends), you can use:
DNA End Repair Mix or T4 DNA polymerase or Klenow Fragment (large fragment) of E. coli DNA polymerase to generate blunt ends due to their 5' to 3' DNA polymerase activity (filling-in of 5' overhangs) and 3' to 5' exonuclease activity (chewing back of 3' overhangs).

What enzymes can be used to remove 5' phosphate groups, and what enzyme can be used to add the phosphate groups back on?

CIP/CIAP or BAP can dephosphorylate the 5' ends of DNA/RNA. T4 Polynucleotide Kinase can add back phosphate groups.

Why are alkaline phosphatases used in cloning protocols? What is a typical protocol for dephosphorylation of nucleic acids?

Alkaline phosphatases are used to dephosphorylate the 5' ends of DNA. In cloning, it is used to prevent self-ligation of vector DNA. Standard ligation of DNA with ligase requires a 5' phosphate to be present on at least one of the ends being joined. When a DNA insert containing phosphates on both 5' termini is added to a dephosphorylated vector, the insert will be efficiently ligated into the vector, but the vector will not be able to self-ligate. Thus, dephosphorylation of vector lowers the number of background colonies containing vector without insert.