SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix

Der SuperScript™ III First-Strand Synthesis SuperMix ist eine optimierte SuperMix Formulierung für die Synthese von Erststrang-cDNA aus gereinigter Poly(A)⁺- oder Gesamt-RNA. Mit diesem System können RNA-Ziele von 100 bp bis > 12 kb nachgewiesen werden. Die Menge des Ausgangsmaterials kann zwischen 0,1 pg und 5 µg Gesamt-RNA variieren.

Verwendung des Superscript™ III First-Strand Synthesis SuperMix
Das Kit enthält Superscript™ III/RNaseOUT™ Enzymgemisch, 2X Erststrang-Reaktionsgemisch und Annealing-Puffer. SuperScript™ III Reverse Transkriptase, im Enzymmix enthalten, ist eine Version von M-MLV RT, die zur Reduzierung der RNase-H-Aktivität entwickelt wurde und eine höhere thermische Stabilität bietet. Das Enzym kann zur Synthese von cDNA bei Temperaturen von 45 – 55 °C verwendet werden und bietet eine bessere Spezifität, höhere cDNA-Ausbeute und mehr Produkt in voller Länge als andere reverse Transkriptasen. Da SuperScript™ III RT nicht signifikant von ribosomaler und Transfer-RNA gehemmt wird, kann sie für die Synthese von cDNA aus Gesamt-RNA verwendet werden. Der RNaseOUT™ Rekombinante RNase-Inhibitor ist im Enzymmix enthalten und schützt vor dem Abbau der Ziel-RNA aufgrund von Ribonuklease-Kontamination. Der 2X Erststrang-Reaktionsmix umfasst 10 mM MgCl₂ und 1 mM von jedem dNTP in einer Puffer-Formulierung, die für die Erststrang-Synthese von cDNA optimiert wurde. Der Annealing-Puffer wird im ersten Template-Primer-Annealing-Schritt verwendet. Separate Röhrchen mit Oligo(dT)₂₀ und Random-Hexamers werden ebenfalls bereitgestellt. Die cDNA-Synthese kann entweder mit Gesamt-RNA oder Poly(A)⁺-RNA, geprimt mit Oligo(dT), Random-Primern oder einem genspezifischen Primer durchgeführt werden.