SuperScript™ IV Reverse Transkriptase

SuperScript™ IV Reverse-Transkriptase (RT) ist ein proprietärer MMLV-Mutant mit hervorragender Robustheit und Zuverlässigkeit in RT-Reaktionen. Es bietet deutlich verbesserte Eigenschaften im Vergleich zu SuperScript™ III in Bezug auf Hemmstoffresistenz, Prozessivität und Reaktionsgeschwindigkeit, bei Beibehaltung aller Vorteile des früheren Enzyms, einschließlich erhöhter Thermostabilität, hocheffizienter Synthese von cDNA in voller Länge und reduzierter RNase-Aktivität. SuperScript™ IV RT sorgt für eine zuverlässige, gleichbleibende und schnelle cDNA-Synthese in Gegenwart von Inhibitoren, die in einer Vielzahl von Proben dazu führen, dass andere aktuell verfügbare RTs nur ineffizient agieren.

SuperScript™ IV RT ist die erste Wahl für alle RT-PCR- und qRT-PCR-Anwendungen in der SuperScript™-Produktfamilie. Der Einsatz ist insbesondere dann empfehlenswert, wenn Reproduzierbarkeit und Zuverlässigkeit der Ergebnisse von entscheidender Bedeutung sind, und wenn Hemmstoffe in der RNA-Probe die cDNA-Synthese stören und zu Verzerrungen in Genexpressionsstudien führen könnten.

Die Merkmale von SuperScript™ IV Reverse Transcriptase beinhalten:
• Deutlich verbesserte Resistenz gegenüber einer Vielzahl von Inhibitoren, die die cDNA-Synthese beeinträchtigen können
• Robuste und spezifische cDNA-Synthese für ein breites Spektrum von Probentypen
• Eine schnellere Reverse-Transkriptase-Reaktion, deren Inkubationszeit von > 50 Min. auf 10 Min. reduziert wird
• Deutlich gesteigerte Prozessivität im Vergleich zu SuperScript™ III RT

Quelle
Gewonnen durch Expression des pol-Gens von M-MLV in E. coli und für eine erhöhte Thermostabilität und Halbwertszeit, Prozessivität, Hemmstoffresistenz sowie reduzierte RNase-H-Aktivität modifiziert.

Leistungs- und Qualitätskontrolle
Endodeoxyribonuklease-, Exodeoxyribonuklease- und Ribonuklease-Assays sowie Ausbeute und Länge des cDNA-Produkts.

Einheitendefinition
Eine Einheit von SuperScript™ IV RT entspricht der Enzymmenge, die benötigt wird, um 1 nmol Desoxyribonukleotid in säurefällbares Material einzubauen, und zwar in 10 Min. bei 37 °C mit Poly(A) oligo(dT)_12-18 als Template/Primer.

Einheiten-Reaktionsbedingungen
50 mM Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM MgCl², 10 mM DTT, 50 mM KCl, 0,5 mM dTTP, 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP, 0,4 mM poly(A) oligo (dT)_12-18 und Enzym in 20 μl für 10 Min. bei 37 °C.