Staphylococcus aureus V-8 Protease

La proteasa Thermo Scientific Staphylococcus aureus V-8, también conocida como endoproteinasa Glu-C, tiene dos pH óptimos, uno a pH 4,0 y el otro a pH 7,8, y es específica para la escisión en el terminal carboxílico de los residuos de ácido glutámico y ácido aspártico. La proteasa también es específica para la digestión glutámica en tampones que no contienen fosfato a un pH óptimo. Los tampones de fosfato a pH 7,8 facilitan la digestión tanto en residuos de ácido glutámico como aspártico.

Características de Staphylococcus aureus V-8 proteasa:

• Especificidad: la especificidad para el ácido glutámico se logra en bicarbonato de amonio, pH 7,8 o acetato de amonio, pH 4.
• Actividad: la enzima de actividad está activa en presencia de muchos agentes desnaturalizantes como SDS, urea y guanidina-HCl.

La proteasa S. aureus V-8 proteasa es muy estable, es capaz de mantener su actividad incluso en 6 M urea, 5,5 M guanidina·HCl, 0,5 % SDS, o 0,5 % SDS + 6 M urea a 0 °C, pH 7,6. Esto está relacionado con el hecho de que la estructura nativa de la proteasa se estabiliza principalmente por interacciones electrostáticas, y no por uniones de hidrógeno y β-estructuras.

Existen dos problemas principales en las digestiones proteolíticas. El primer problema es que la reacción se debe desactivar para detener la digestión y diluir así la muestra. El segundo problema es que la muestra está contaminada con la proteasa y posiblemente con fragmentos de proteasa autodigeridos. Estos problemas se pueden resolver gracias a la proteasa V-8 inmovilizada. En el caso de las proteasas inmovilizadas, no es necesario absorberlas y no hay problemas con la contaminación de la muestra por proteasa o la autodigestión de la proteasa. Basta con separar la solución de la muestra de la matriz de agarosa para resolver estos problemas.

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