Restore™ Western Blot Stripping-Puffer

Thermo Scientific Restore Western Blot Stripping Buffer entfernt primäre und sekundäre Antikörper von Nitrozellulose- und PVDF-Membranen sicher und effektiv und ermöglicht so die Wiederverwendung der chemolumineszenten Western Blots.

Merkmale von Restore Western Blot Stripping Buffer:

• Spart Zeit – Gele und Blots wiederverwenden
• Spart teure Proben – Erneutes Verwenden der Membran mit der gleichen Zielprobe
• Effektiv – Formulierung ist effizienter beim Strippen von Antikörpern als selbst angesetzte Puffer
• Schonend – Zielantigen wird beim Strippen nicht beschädigt und ermöglicht somit eine effiziente Wiederverwendung
• Geruchlos – Keine Mercaptane, kein beißender Geruch
• Wirtschaftlich – Weniger teuer als andere kommerzielle Stripping-Puffer

Produktdetails
Die Durchführung von Gelelektrophorese und Immunblot-Assays im zweifacher Ausführung zum Testen neuer Primärantikörper oder Antikörperkonzentrationen ist zeitaufwändig und teuer. Restore Western Blot Stripping Buffer vermeidet diese Verschwendung bei der Detektion von Immunblots mit Chemilumineszenzsubstraten für das Western-Blot-Verfahren. Restore Stripping Puffer ermöglicht die saubere und effiziente Entfernung von Primär- und Sekundärantikörpern aus Immunblots, ohne das immobilisierte Antigen zu entfernen oder zu beschädigen, sodass Blots zuverlässig abgelöst und wiederverwendet werden können.

Der chemolumineszente Western-Blot-Nachweis mit Reagenzien wie Thermo Scientific SuperSignal Substraten für Meerrettich-Peroxidase ist heute eine der am häufigsten verwendeten und empfindlichsten Methoden. Da diese Substrate nicht präzipitieren und nicht an Membranoberflächen binden, ist nach einem Chemolumineszenz-basierten Western-Blot-Nachweis das Entfernen affinitätsgebundener primärer und sekundärer Antikörper möglich. Damit er wirksam ist, muss ein Stripping-Puffer stark genug für das Ablösen gebundener Antikörper, dabei aber gleichzeitig schonend genug sein, damit die übertragenen Zielproteine auf der Nitrozellulose bzw. PVDF-Membran intakt bleiben. Der Restore Western Blot Stripping Buffer besitzt diese Merkmale.

Durch das Entfernen der Antikörper und die Rehybridisierung werden keine seltenen bzw. teuren Proben verschwendet, da hierdurch der Einsatz mit mehreren Gelen zur Untersuchung verschiedener Zielstrukturen vermieden werden kann. Mit dem Restore Western Blot Stripping-Puffer kann der primäre Antikörper von einer einzelnen Membran von einem Gel entfernt werden. Je nach Affinität des primären Antikörpers dauert das Entfernen des Antikörpers („Stripping“) vom Blot nur 15 bis 30 Minuten. Nach dem Stripping des Antikörpers und einem Blockierschritt kann ein neuer primärer Antikörper zum Nachweis verwendet werden. Alternativ kann ein Blot gestrippt und mit angepassten Antikörperkonzentrationen rehybridisiert werden, um die Bedingungen zu optimieren, nachdem zunächst schlechte Ergebnisse erzielt wurden.

Anwendungen
• Verwenden Sie einen Nitrozellulose- oder PVDF-Blot erneut, um ein anderes Ziel mit einem anderen Primärantikörper nachzuweisen
• Untersuchen Sie einen Blot erneut, um Antikörperkonzentrationen zu korrigieren oder zu optimieren, die beim ersten Mal erfolglos waren

Protokollzusammenfassung
• Blot zum Entfernen von chemolumineszentem Substrat waschen.
• Blot 5 bis 15 Minuten lang bei 37 °C in Restore Western Blot Stripping Buffer inkubieren (bei einigen Antikörpern reicht Raumtemperatur aus).
• Blot entfernen und in Waschpuffer (TBS-T oder PBS-T) waschen.
• Testen, ob Antikörper ausreichend entfernt wurden.
• Durchführen des nächsten Immunblot-Experimentes.