Pierce™ Phosphoprotein Phosphate Estimation Assay Kit

Das Thermo Scientific Phosphoprotein Phosphat-Bestimmungs-Kit ermöglicht die Klassifizierung und Identifizierung von Proteinen als phosphoryliert (Serin und Threonin) sowie die semi-quantitative Bestimmung des Phosphorylierungsgrads.

Eigenschaften des Phosphoproteinphosphat-Bestimmungs-Kits:

• Spezifisch — misst nur Phosphoserin (p-Ser) und Phosphothreonin (p-Thr); Misst kein Phosphotyrosin (p-Tyr)
• Praktisch — Reagenzgläser und 96-Well Mikrotiterplatten-Protokolle im Lieferumfang enthalten und benötigt weniger als 90 Minuten für die Durchführung
• Semi-quantitativ — berechnet Molwerte von Phosphat (P) pro Mol Protein mit dem mitgelieferten Phosvitin-Standard
• Anpassbar — Format kann an die Entwicklung spezifischer Assays für reine Phosphoproteine angepasst werden, wenn zuvor charakterisierte Standards verfügbar sind

Das Phosphoproteinphosphat-Bestimmungsassay-Kit wurde entwickelt, um die Charakterisierung des Status und des Umfangs der Phosphorylierung von gereinigten Proteinproben zu unterstützen. Der Assay basiert auf der alkalischen Hydrolyse von Phosphaten an Seryl- oder Threonyl-Rückständen in Phosphoproteinen und der Quantifizierung des freigesetzten Phosphats mit Malachitgrün und Ammoniummolybdat. Der Assay lässt sich in 96-Well Mikrotiterplatten oder in Teströhrchen leicht durchführen und dauert ca. 90 min.

Anwendungen:
• Identifizieren Sie Proteine, die Phosphoserin oder Phosphothreonin-Phosphorylierungen enthalten
• Schätzen Sie die Menge der pS- und pT-Phosphorylierung
• Entwickeln Sie spezifische quantitative Assays für gut charakterisierte Phosphoproteine von Interesse

. Mit dem Assay kann festgestellt werden, ob ein gereinigtes Protein entweder Phospho-Serin (p-Ser) oder Phospho-Threonin (p-Thr) enthält und es kann das Niveau dieser Art der Phosphorylierung abgeschätzt werden. Zur Quantifizierung wird die Test-Proteinprobe mit spezifischen Konzentrationen von Phosvitin, einem Phosphoprotein mit bekanntem Phosphorylierungsgrad, verglichen. Durch die alkalische Hydrolyse wird kein Phosphat von Phosphotyrosin (p-Tyr)-Resten in einer Peptidbindung freigesetzt. Daher zeigt ein negatives Ergebnis für eine unbekannte gereinigte Proteinaufarbeitung an, dass das Protein entweder (1) kein Phosphoprotein oder (2) ausschließlich an Tyrosinrückständen phosphoryliert ist. Im letztgenannten Fall ist eine Western Blot Analyse mit einem Anti-Phosphotyrosin-Antikörper erforderlich, um zwischen diesen beiden Möglichkeiten zu unterscheiden.