PEG4-SPDP (PEGylated, long-chain SPDP crosslinker)

El PEG4-SPDP Thermo Scientific Pierce es un entrecruzador multifuncional para la conjugación de proteínas a través de entrecruzamientos de amina a amina o de amina a sulfhidrilo que contienen un grupo de cuatro unidades de polietilenglicol (PEG) y un enlace de disulfuro reducible (escindible).

Características del PEG4-SPDP:

• Conjugación de aminas eficaz: el éster NHS proporciona una conjugación efectiva a lisinas, extremos N de péptidos y otras aminas primarias
• Conjugación de sulfhidrilo reversible: el grupo de piridilditio permite el enlace de disulfuro con cisteínas reducidas y otros grupos de sulfhidrilo, proporcionando un enlace estable pero escindible
• Polietilenglicol: los grupos PEG son flexibles, no inmunogénicos, hidrófilos y a menudo mejoran la solubilidad de las moléculas adheridas
• Brazo espaciador: conecta aminas primarias y sulfhidrilos diana a distancias de hasta 25,7 angstroms, en comparación con el PEG12-SPDP (54,1 angstroms)

Los reactivos de tipo SPDP tienen un éster de N-hidroxisuccinimida (NHS) reactivo a la amina en un extremo y un grupo de 2-piridilditio suflhidrilo reactivo en el extremo opuesto. PEG4-SPDP tiene un brazo espaciador de polietilenglicol de cuatro unidades, que confiere mayor solubilidad al entrecruzador y a las proteínas vinculadas en comparación con los entrecruzadores que solo tienen espaciadores de hidrocarburos. Los reactivos de piridilditiol producen enlaces que contienen disulfuro que pueden escindirse con agentes reductores como el ditiotreitol (DTT). Los experimentos de entrecruzamiento con reactivos de SPDP no se limitan a aquellos que involucran proteínas. Se puede modificar o entrecruzar cualquier molécula con aminas primarias y grupos sulfhidrilo usando un reactivo de SPDP.

La conjugación de los reactivos de SPDP a las reacciones de aminas primarias a través del éster de NHS se realiza con mayor frecuencia con un pH de 7 a 8 en fosfato, carbonato/bicarbonato o tampón de borato. También son efectivos otros tampones que no contienen aminas primarias (o tioles o reactivos reductores de disulfuro; consulte el análisis sobre la reactividad al sulfhidrilo).

Se puede realizar una reacción con el grupo piridilditio reactivo a sulfhidrilo de forma simultánea o después de la reacción de la amina, y ocurre óptimamente a pH de 7 a 8. La reacción da lugar a un desplazamiento de piridin-2-tiona, cuya concentración puede determinarse midiendo la absorbencia a 343 nm. Los tampones de reacción deben estar sin tioles y agentes reductores de disulfuro hasta que se desee desactivar o reducir el 2-piridilditio.

Referencias del producto:
Guía de aplicación del entrecruzador: búsqueda de referencias literarias recientes para este producto

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