AminoLink™ Kupplungsharz und Immobilisierungskit

Das AminoLink Immobilisierungskit enthält AminoLink Coupling Resin und zugehörige Reagenzien, die für die Durchführung von 5 Proteinimmobilisierungen mit einer erwarteten Ausbeute von 2 bis 20 mg Protein pro Kolonne ausreichen.AminoLink Coupling Resin ist eine quervernetzte 4 %-ige Agarose, die mit Aldehydgruppen aktiviert wurde, was die kovalente Immobilisierung von Antikörpern und anderen Proteinen durch primäre Amine ermöglicht.

Merkmale von AminoLink Coupling Resin:

•AminoLink Coupling Resin—aldehyd-aktiviert, quervernetzt, Beads mit 4 %-iger Agarose
• Ideal für Antikörper und andere Proteine—immobilisiert Moleküle über primäre Amine (-NH2)
•Flexible Kopplungsbedingung—effizient (>85 %) über einen breiten Bereich an pH-Werten (4-10) und Pufferbedingungen hinweg (PBS oder anderer Puffer ohne Amin mit oder ohne organisches Lösungsmittel)
•Stablie, dauerhafte Immobilisierung—Kopplungsreaktion führt zu einer stabilen, leckresistenten sekundären Aminbindung zwischen Harz und Ligand
•Besser als Immobilisierung mit CNBr-aktivierte Agarose—Bindung ist stabiler und ungeladen, was zu weniger unspezifischen Bindungen bei Affinitätsaufreinigungsverfahren führt
•Vielseitig und wiedeverwendbar—Aufbereitetes Affinitätsharz ist für Säulen- und Stapel-Affinitätsverfahren einsetzbar und für typische Anwendungen auf der Grundlage von Proteinbindungsinteraktionen wiederverwendbar.

Proteine und andere Moleküle mit primären Aminen lassen sich kovalent an AminoLink Resin binden (immobilisieren), um Chromatographiesäulen für die Affinitätsaufreinigung herzustellen.Aldehyd-Gruppen bilden stabile sekundäre Aminbindungen mit primären Aminen. Diese sind in der Regel reichlich in den Seitenketten von Lysin-Resten (K) bei Proteinen vorhanden und leicht zugänglich.Sobald ein Protein immobilisiert wurde, kann das vorbereitete Affinitätsharz für unterschiedliche Batch- und Säulen-basierte Affinitätsreinigungsverfahren eingesetzt werden, welche auf Bindungsinteraktionen mit immobilisierten Proteinen beruhen.Da Harz und Verbindung unter den meisten gängigen Bindungs- und Elutionsbedingungen der Affinitätschromatographie stabil bleiben, ist die Verwendung für mehrere Läufe im Rahmen der Affinitätsaufreinigung möglich.

Die AminoLink Resin-Immobilisierungsreaktion umfasst die Spontanbildung von Schiff-Basisbindungen zwischen Aldehyden und Aminen und deren anschließende Stabilisierung durch Inkubation mit einem milden Reduktionsmittel.Die als reduktive Aminierung bezeichnete gesamte Kopplungsreaktion nimmt 4 bis 6 Stunden in Anspruch und erfolgt mit einfachen Amino-freien Puffern wie PBS.Die Kopplungseffizienz mit Antikörpern und typischen Proteinen liegt im Allgemeinen über 85 %, was pro Milliliter Harz 1 bis 20 mg immobilisiertes Protein ergibt.

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