Placa de centrifugación de proteína G Pierce™ para la detección de IgG

La placa de centrifugación de proteína G agarosa Thermo Scientific™ Pierce™ para detección de IgG ofrece un formato de alto rendimiento para la purificación y detección rápidas de anticuerpos y para la inmunoprecipitación (IP). Cada pocillo de la placa de centrifugación de 96 pocillos puede procesar 10–100 µl de suero, sobrenadante de cultivo celular o muestras de líquido de ascitis.

Características de la proteína G agarosa Pierce:

• Proteína G: la proteína G inmovilizada es idónea para la purificación de IgG policlonal a partir de suero de humano, de ratón, de vaca, de cabra y de oveja, incluido el isotipo IgG3 de humano y el IgG1 de ratón.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína G mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Capacidad estándar: la proteína G agarosa Pierce tiene una carga normal de proteína G inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión de entre 11 y 15 mg de IgG de humano por ml de resina.

La proteína G agarosa Pierce es una proteína G recombinante inmovilizada covalentemente en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de gran calidad (CL-6B). Esta particular variedad de resina de afinidad proporciona la combinación más versátil de funciones cromatográficas para aumentar el rendimiento y conseguir una purificación de alta pureza de la IgG completa procedente de muestras de suero de mamíferos. Los gránulos de agarosa tienen propiedades fisicoquímicas idóneas para muchos sistemas de purificación por afinidad.

La proteína G es una proteína de la pared celular bacteriana del grupo G Streptococcus y que ahora se produce como recombinante en E. coli. Como la proteína A, la proteína G se une a la mayoría de inmunoglobulinas de humano, principalmente a través de sus regiones Fc. La proteína G nativa posee dos lugares de unión con la inmunoglobulina y lugares de unión con la albúmina y la superficie celular. En la forma recombinante de la proteína G, estos lugares de unión con la superficie celular se han eliminado para reducir las uniones inespecíficas cuando se purifican inmunoglobulinas. La proteína G recombinante tiene una masa de aproximadamente 21,6 kDa, pero su tamaño aparente según SDS-PAGE es de entre 31 y 34 kDa. La función de unión a IgG es óptima a un pH de 5; no obstante, también se produce una unión eficaz en condiciones casi neutras (pH de 7,0 a 7,2).

En comparación con la proteína A, la proteína G se une a una mayor variedad de subtipos de IgG procedentes de sueros de humano, de ratón y de rata. Concretamente, además de unirse a otros isotipos igual que la proteína A, la proteína G tiene una mayor capacidad de unión a la IgG3 de humano, a la IgG1 de ratón y a los tres isotipos de IgG de rata. Por esta razón, la proteína G se recomienda, por lo general, para aplicaciones en las que participan estas especies e isotipos de anticuerpos. En lo que respecta a otras especies, la proteína G tiene una mayor capacidad de unión a la IgG de vaca, cabra y oveja, pero presenta una menor capacidad de unión a la IgG de cerdo, cobaya, perro y gato que la proteína A.

La proteína G agarosa Pierce se prepara con el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Scientific AminoLink, que ofrece varias ventajas en comparación con los métodos tradicionales de inmovilización del ligando. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. De esta forma, se obtiene una resina de gran capacidad de unión que mantiene la proteína G inmovilizada funcional después de varias series de purificación de anticuerpos.

La proteína G agarosa Pierce es eficaz en la purificación por afinidad de la IgG a partir de sueros y otros fluidos de muchas especies de mamíferos. La proteína G es especialmente adecuada para su empleo con anticuerpos de ratón (incluida la IgG1) además de para la mayoría de isotipos de IgG de muestras de humano, cabra y oveja.

Propiedades de la agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10.000 a 4.000.000 daltons
• Caudal volumétrico máximo: aprox. 1 ml/minuto (en una columna de 1 cm de diámetro)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: menos de 25 psi (1,5 bar), definida como la máxima caída de presión en una columna que la resina puede soportar. (Nota: Es posible que la presión manométrica indicada en el aparato de cromatografía líquida se refiera a la presión total del sistema en lugar de a la caída de presión en la columna).

Más datos del producto
• Uso de proteínas de unión de anticuerpos para la purificación de anticuerpos