GlycoLink™ Immobilization Kit

El kit de inmovilización Thermo Scientific GlycoLink contiene columnas de afinidad y reactivos para inmovilizar las glicoproteínas a través de grupos de azúcar oxidados para su uso en aplicaciones de purificación por afinidad o estudios de interacciones proteína-proteína.

Características del kit de inmovilización GlycoLink:

• Gran capacidad: inmoviliza de 1 a 10 mg de anticuerpo oxidado u otra glicoproteína por mililitro de resina
• Rápido y eficiente: inmoviliza en tan solo 30 minutos; consigue al menos un acoplamiento del 90 % de la mayoría de las glicoproteínas en menos de 4 horas (la eficiencia depende de la cantidad y el tipo de glicosilación)
• Inmovilizado específico: la resina UltraLink activada por hidracida se conjuga solo con glicoproteínas purificadas cuyos grupos de azúcar (por ejemplo, ácido siálico) se han oxidado suavemente con periodato
• Fijación sólida: la estructura de resonancia de los enlaces de hidrazona es suficientemente estable para purificaciones de afinidad múltiple con un lote de resina preparada; no se requiere ningún paso de estabilización
• Conserva la función del anticuerpo: inmoviliza la IgG a través de la región Fc, manteniendo ambos sitios de unión del antígeno disponibles para capturar el elemento diana

Los kits de GlycoLink utilizan resina activada por hidracida y un catalizador especial para preparar columnas de afinidad con anticuerpos policlonales, que típicamente tienen abundantes carbohidratos (glicosilación) en sus porciones de Fc. Cualquier proteína glicosilada (incluso anticuerpos monoclonales) que contenga grupos de hidratos de carbono oxidables por peridodato puede inmovilizarse con estos kits para hacer columnas de afinidad reutilizables. Los anticuerpos inmovilizados por esta química de inmovilización de hidrazida tienen puntos de unión de antígenos sin obstrucciones y una capacidad de purificación óptima. Las columnas preparadas con glicoproteínas o anticuerpos estables pueden regenerarse y reutilizarse al menos cinco veces para la purificación por afinidad sin una pérdida significativa de la capacidad de unión.

Aplicaciones:
• Purifica los antígenos utilizando anticuerpos covalentemente acoplados
• Determina los socios de unión para una glicoproteína de interés
• Realiza purificaciones de afinidad a gran escala

El método del Kit de inmovilización de GlycoLink es especialmente útil para las glicoproteínas, como los anticuerpos policlonales, porque permite que las moléculas se adjunten a un dominio que no interferirá con sitios de unión activos que son críticos para la purificación de afinidad prevista. Las fracciones de carbohidratos en las glicoproteínas contienen azúcares comunes con grupos cis-diol que se oxidan fácilmente con metaperyodato de sodio para producir aldehídos. Una vez incubados con la resina hidrazida, estos grupos aldehídos reaccionan con los grupos hidrazidas en la resina para formar uniones estables y covalentes. Esta reacción se ha mejorado gracias al catalizador de acoplamiento GlycoLink Thermo Scientific, aumentando la eficacia del acoplamiento y reduciendo los tiempos de incubación. La reacción de acoplamiento completa se produce en dos a cuatro horas en un simple tampón no-amina que contenga el catalizador. La eficacia de acoplamiento con anticuerpos y glicoproteínas típicas suele ser superior al 85 %, lo que da lugar a 1 a 10 mg de proteína inmovilizada por mililitro de resina de hidracida Thermo Scientific UltraLink.

Más datos del producto
• Inmovilización y conjugación mejoradas de glicoproteínas

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