ViraPower™ HiPerform™ T-Rex™ Gateway™ Expressionssystem
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Invitrogen™

ViraPower™ HiPerform™ T-Rex™ Gateway™ Expressionssystem

Das ViraPower™ HIPerform™ T-REx™ Gateway™ Expressionssystem enthält alle Komponenten, die zur Generierung von Lentiviren erforderlich sind, einschließlich Vektor-Kit, 293FT-Zelllinie undWeitere Informationen
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KatalognummerMenge
A1114120 Reaktionen
Katalognummer A11141
Preis (EUR)
-
Menge:
20 Reaktionen
Das ViraPower™ HIPerform™ T-REx™ Gateway™ Expressionssystem enthält alle Komponenten, die zur Generierung von Lentiviren erforderlich sind, einschließlich Vektor-Kit, 293FT-Zelllinie und Support-Kit. Dieses Kit kombiniert Invitrogens ViraPower™ HiPerform™ Lentivirus, T-REx™ und Gateway™ Technologien, um einfaches rekombinationsbasiertes Klonieren und lentiviral-basierte, regulierte (Tetracyclin-induzierbare), High-Level-Expression eines Zielgens bei sich teilenden und nicht teilenden Säugetierzellen zu ermöglichen. Der pLenti6.3⁄ TO⁄ V5 DEST-Vektor ist mit zwei wichtigen genetischen Elementen ausgestattet, was ihn zu einem HiPerform™ Vektor macht: Das Woodchuck Posttranscriptional Regulatory Element (WPRE) und die zentrale Polypurin-Trakt-(cPPT)-Sequenz aus dem HIV-1-Integrase-Gen erzeugen im Vergleich zu Vektoren, die diese Elemente nicht aufweisen, eine mindestens 4-fache Zunahme der Proteinexpression.

Vorteile
• Erzeugt ein replikationsunfähiges Lentivirus für die Transduktion von sich teilenden und sich nicht teilenden Säugetierzellen
• Einfaches, rekombinationsbasiertes Klonieren mithilfe der Gateway™ Technologie
• Stabile, langfristige Tetracyclin-regulierte Expression
• Verbesserte Proteinexpression, bis zu 4-fach oder höher, im Vergleich zu herkömmlichen lentiviralen Expressionssystemen

Hauptmerkmale
• WPRE (Woodchuck Posttranscriptional Regulatory Element) aus dem Hepatitis-Virus des Murmeltiers steigert die Transgen-Expression und cPPT (zentraler Polypurin-Trakt) vom HIV-1-Integrase-Gen die Kopienanzahl des in das Wirtsgenom integrierenden Lentivirus und so den Virustiter. Gemeinsam erzeugen WPRE und cPPT in den meisten Zelltypen mindestens eine vierfache Zunahme der Proteinexpression im Vergleich zu anderen Vektoren, die diese Elemente nicht enthalten.
• Hybrider Promoter bestehend aus dem humanen Cytomegalovirus-(CMV)-Promoter und zwei Tetracyclin-Operator-2-(Teto2)-Standorten für die hochgradig regulierte Expression des Zielgens
• Blasticidin-Selektionsmarker für eine stabile Selektion unter Kontrolle des SV40-Promoters

Das Kit enthält
• ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™ Vektor-Kit (Kat.-Nr. A11144)
• ViraPower™ BSD lentivirales Support-Kit (Kat.-Nr. K497000)
• 293FT-Zelllinie (Kat.-Nr. R70007)
• Gateway™ LR Clonase™ II Plus Enzymgemisch (Kat.-Nr. 12538120)
• One Shot™ Stbl3™ chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. C737303)
• Geneticin™ (Kat.-Nr. 10131035)
• pENTR™ Gus positives Kontrollplasmid

Nur für Forschungszwecke. Nicht für therapeutische oder diagnostische Zwecke vorgesehen.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications
Bakterielle AntibiotikaresistenzAmpicillin (AmpR), Blasticidin (BsdR)
KlonierungsmethodeGateway™
Konstitutives oder induktives SystemInduzierbar
LiefertypLentiviral
Zur Verwendung mit (Anwendung)Proteinexpression
Zur Verwendung mit (Geräte)Gateway™, HiPerform™, T-REx™, ViraPower™
Gateway EnzymLR Clonase™ II Plus, LR Clonase™ II
InduktionsmittelDoxycyclin, Tetracyclin
HauptbedienfelderVirale Expression
Anzahl Reaktionen20 Reactions
PCR-EnzymÜberprüfungspolymerase
ProduktlinieGateway, HiPerform, T-REx, ViraPower
ProdukttypExpressionssystem
ProteinmarkierungV5-Epitop-Tag
Menge20 Reaktionen
ReplikationsursprungpUC-Ursprung
Selektionsmittel (eukaryotisch)Blasticidin
Selektionsmarker eukaryotischBsdR
Selektionsmarker PromoterPGK-Promoter
Spezielle ElementeWPRE, cPPT
ZelltypGehäuse 293-FT
FormatKit
PromoterCMV/TO
VectorpLenti
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Inhalt

Das ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™ Expressionssystem umfasst die folgenden Komponenten:
• ViraPower™ HiPerform™ T-REx™ Gateway™ Vektor-Kit (Kat.-Nr. A11144) mit:
  • 6 μg pLenti6.3⁄TO⁄V5-DEST Vektor (40 µl Vektor bei 150 ng⁄µl im TE-Puffer, pH 8,0)
  • 20 μg pLenti3.3⁄TR-Vektor (40 µl Vektor bei 0,5 µg⁄µl im TE-Puffer, pH 8,0)
  • 10 μg pLenti6.3⁄TO⁄V5-GW⁄lacZ Plasmid (20 µl Plasmid bei 0,5 µg⁄µl im TE-Puffer, pH 8,0)
  • 1 ml Tetracyclin (10 mg⁄ml in Wasser)

  • • ViraPower™ BSD lentivirales Support-Kit (Kat.-Nr. K497000) mit:
  • 195 μg ViraPower™ Lentiviral Packaging-Mix (enthält 195 μl einer Mischung aus pLP1-, pLP2- und pLP⁄VSVG-Plasmiden, bei 1 μg⁄μl im TE-Puffer, pH 8,0)
  • 0,75 ml Lipofectamine™ 2000 (Kat.-Nr. 11668027)
  • 50 mg Blasticidin-Pulver (Kat.-Nr. R21001)

  • • 293FT-Zelllinie (Kat.-Nr. R70007): 1 Fläschchen mit 3 x 106 gefrorenen Zellen in 1 ml Gefriermedium.
    • Gateway™ LR Clonase™ II Plus Enzymgemisch (Kat.-Nr. 12538120): 40 μl Gateway™ LR Clonase™ II Plus Enzymgemisch und 40 μl Proteinase-K-Lösung in einer Konzentration von 2 μg⁄ml.
    • One Shot™ Stbl3™ chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. C737303) 21 x 50 μl Stbl3™ Zellen, 6 ml S.O.C. Medium und 50 μl pUC19-Kontroll-DNA (10 pg⁄μl).
    • Geneticin™ (Kat.-Nr. 10131035): 20 ml Geneticin™ Lösung (50 mg⁄ml).
    • pENTR™ Gus positives Kontrollplasmid

    Lagerung

    • Vektoren: -20 °C
    • ViraPower™ Packaging-Mix: -20 °C
    • LR Clonase™ II Plus Enzymgemisch: -20 °C für eine Lagerung von bis zu 6 Monaten, -80 °C für die langfristige Lagerung
    • Tetracyclin: -20 °C (vor Licht schützen)
    • Blasticidin: -20 °C
    • Geneticin: 4 °C oder -20 °C
    • Lipofectamine™ 2000: 4 °C (nicht einfrieren)
    • One Shot™ Stbl3™ chemisch kompetente E. coli: -80 °C
    • 293 FT-Zellen: Flüssiger Stickstoff
    • pENTR™ Gus Positivkontrolle: -20 °C

    Häufig gestellte Fragen (FAQ)

    Can I perform the single-step protocol for the BP/LR Clonase reaction using BP Clonase enzyme and LR Clonase enzyme instead of BP Clonase II enzyme and LR Clonase II enzyme?

    In the single-step protocol for the BP/LR Clonase reaction, we would not recommend substituting the BP Clonase II/LR Clonase II enzymes with BP Clonase /LR Clonase enzymes as this would result in very low recombination efficiency.

    Do you have a recommended single-step protocol for BP/LR recombination?

    Yes, we have come up with a single-step protocol for BP/LR Clonase reaction (http://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/gateway-cloning.html#1), where DNA fragments can be cloned into Destination vectors in a single step reaction, allowing you to save time and money.

    How can I move my gene of interest from a Gateway-adapted expression clone to a new Destination vector as I have lost the entry clone?

    We would recommend performing a BP reaction with a Donor vector in order to obtain an entry clone. This entry clone can then be used in an LR reaction with the Destination vector to obtain the new expression clone.

    Can I purchase the 5X LR Clonase buffer or 5X BP Clonase buffer separately?

    We do not offer the 5X LR Clonase buffer and 5X BP Clonase buffer as standalone products. They are available as part of the enzyme kits.

    Do you offer Gateway vectors for expression in plants?

    We do not offer any Gateway vectors for expression in plants.

    Zitierungen und Referenzen (2)

    Zitierungen und Referenzen
    Abstract
    Functional constraints of nuclear-mitochondrial DNA interactions in xenomitochondrial rodent cell lines.
    Authors:Dey R, Barrientos A, Moraes CT
    Journal:J Biol Chem
    PubMed ID:10908562
    'The co-evolution of nuclear and mitochondrial genomes in vertebrates led to more than 100 specific interactions that are crucial for an optimized ATP generation. These interactions have been examined by introducing rat mtDNA into mouse cells devoid of mitochondrial DNA (mtDNA). When mtDNA-less cells derived from the common mouse (Mus ... More
    Expression of mtDNA and nDNA encoded respiratory chain proteins in chemically and genetically-derived Rho0 human fibroblasts: a comparison of subunit proteins in normal fibroblasts treated with ethidium bromide and fibroblasts from a patient with mtDNA depletion syndrome.
    Authors:Marusich MF, Robinson BH, Taanman JW, Kim SJ, Schillace R, Smith JL, Capaldi RA
    Journal:Biochim Biophys Acta
    PubMed ID:9540845
    Although much progress has been made in identifying genetic defects associated with mitochondrial diseases, the protein expression patterns of most disorders are poorly understood. Here we use immunochemical techniques to describe subunit expression patterns of respiratory chain enzyme complexes II (succinate dehydrogenase: SD) and IV (cytochrome c oxidase: COX) in ... More