GeneArt™ Seamless Cloning and Assembly Kit

El kit de montaje y clonación GeneArt™ Seamless permite la clonación direccional y simultánea de entre 1 y 4 fragmentos de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) en cualquier orden, en cualquier vector linealizado y en una sola reacción a temperatura ambiente de 30 minutos. El kit contiene todo lo necesario para el montaje de fragmentos de ADN y su transformación en E. coli para la selección y el crecimiento de vectores recombinantes.

• Velocidad y facilidad: clone hasta 4 fragmentos de ADN, con la secuencia de su elección, de forma simultánea en un solo vector (hasta 13 Kb); no requiere digestión de restricción, ligadura o sitios de recombinación
• Precisión y eficacia: diseñado para permitirle clonar lo que desee, donde desee, en la orientación que desee y lograr hasta un 90 % de clones correctos sin dejar secuencias adicionales
• Flexibilidad del vector: utilice nuestro vector lineal o un vector de su elección
• Herramientas gratuitas: diseñe oligonucleótidos de ADN y mucho más con nuestra interfaz gratuita basada en la web que le guía paso a paso por su proyecto
• Diversas aplicaciones: optimice muchas técnicas de biología sintética y de biología molecular con la rápida combinación, adición, eliminación o intercambio de segmentos de ADN

Para la clonación de más de 4 fragmentos de ADN, moléculas finales de más de 110 Kb o para el uso de elementos de ADN preexistentes demasiado largos para ser amplificados por PCR, por favor considere el sistema de ensamble genético GeneArt™ High-Order (n.º de referencia A13285).

Creación simple y rápida de clones
La clonación GeneArt™ Seamless es un proceso simple, de dos pasos, que consiste en una reacción de ensamble basada en tubos seguida por la transformación en E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10. El kit utiliza las propiedades de una mezcla enzimática exclusiva para el montaje de los fragmentos de ADN con homología de terminaciones compartidas sin dejar secuencias extra ni cicatrices (sin problemas). Una parte de la reacción de montaje se transforma entonces en las células competentes TOP10 proporcionadas, lo que produce clones listos para su análisis al día siguiente. La homología de terminaciones de 15 pares de bases requerida se puede crear con facilidad mediante la amplificación de PCR con oligonucleótidos de ADN personalizados.

Eficacia, flexibilidad y precisión de la clonación
Con el kit de clonación y ensamble GeneArt™ Seamless los principales factores que afectan a la eficacia de la clonación son el tamaño de los elementos de ADN (100 bp a 5 Kb), el tamaño total de la molécula final (≤ 13 Kb), así como la calidad y especificidad del fragmento. El extremo terminal de los fragmentos de PCR (salientes A o romos) no afecta a la eficacia de la clonación.

Las eficiencias típicas de clonación para diferentes cantidades de fragmentos clonados en pUC19L son las siguientes:
• 90 % para un solo elemento de ADN de 5 Kb
• 70 % para 4 fragmentos de 1 Kb cada uno
• 40 % para 4 fragmentos de ADN de 2 Kb cada

El éxito de la clonación es independiente de la secuencia de inserción y el tipo de vector, lo que le permite diseñar y agregar casi cualquier secuencia deseada o combinación de secuencias a cualquier plásmido siempre y cuando pueda ser linealizada por la digestión de la enzima de restricción o por PCR. Los clones circulares que se obtienen de la reacción contienen solo la secuencia del vector, los insertos y las homologías correspondientes originales, sin inserciones de nucleótidos extraños.

Soporte para clonación en sílice
Un paso clave en la clonación GeneArt™ Seamless es el diseño correcto de fragmentos y oligonucleótidos con la homología y el espaciado apropiados para ayudar a asegurar el ensamble exitoso de su clon. Con el fin de simplificar y acelerar el proceso de diseño, proporcionamos una herramienta gratuita en línea para ayudarle a diseñar su experimento in silico. La herramienta comprueba la compatibilidad del diseño experimental con las especificaciones del producto, diseña oligonucleótidos de ADN con homología final para la amplificación PCR de los diferentes elementos a clonar y presenta al usuario una representación gráfica del vector, así como una secuencia anotada descargable en formato GenBank, compatible con el software Vector NTI™.

Aplicaciones
El kit de clonación y ensamble GeneArt™ Seamless está diseñado para potenciar los experimentos de clonación y ensamble de ADN en una amplia gama de aplicaciones de biología molecular y biología sintética, entre otras. El producto permite la creación de vectores de expresión modulares, con piezas intercambiables, y se puede utilizar para realizar una variedad de tareas que de otro modo requerirían múltiples pasos. Utilice el kit para, simplemente, construir proteínas de fusión; eliminar, reemplazar o agregar elementos de ADN como sitios de restricción en un vector existente, y realizar muchas otras técnicas que requieren la manipulación de secuencias genéticas.