El kit de ensamble de tipo IIs GeneArt®, Aar I, proporciona clonación y ensamble sin problemas de hasta 8 fragmentos de ADN mediante el corte y la ligadura simultáneos en una sola reacción. El kit utiliza una tecnología similar a la clonación Golden Gate con la enzima de restricción de tipo IIS Aar I y puede usarse para ensamblar varios fragmentos en un orden predeterminado en cualquier vector compatible. Dado que el ensamblado de tipo IIS no se basa en la recombinación homóloga, existe un riesgo mínimo de rearreglos y se requiere una confirmación mínima de la secuencia de la construcción final.

El kit se ofrece en tres versiones, cada una con una enzima de restricción de tipo IIs diferente (Aar I, Bsa I o Bbs I). Todas las versiones incluyen una mezcla de enzimas todo en uno, un vector de clonación y controles de clonación. Use nuestra herramienta de diseño de primers y construcciones GeneArt® para determinar el kit de ensamblaje GeneArt® apropiado para sus fragmentos; la herramienta proporciona una interfaz fácil de usar para diseñar su construcción y crear y ordenar imprimaciones, si fuera necesario.

• Ensamble múltiples fragmentos de ADN en cualquier orden, en cualquier vector compatible, sin marcas
• Evite las recombinaciones homólogas y rearreglos asociados al clonar secuencias homólogas o secuencias repetitivas
• Se usa para el ensamble de TAL, variantes de genes y secuencias repetitivas
• Cree sus propios vectores de clonación y expresión con elementos vectoriales personalizados
• Minimice la confirmación de secuencia de la construcción final
• Elija entre tres enzimas de tipo IIs

Clonación de tipo IIs
La clonación de tipo IIs GeneArt® es un proceso simple, de dos pasos, que consiste en una reacción de ensamble in vitro seguida de transformación en E. coli competente. La endonucleasa de restricción de tipo IIs Aar I reconoce una secuencia asimétrica de ADN y corta la molécula de ADN a una distancia definida del sitio de reconocimiento Aar I. Los extremos de su fragmento de ADN se pueden diseñar para que los flanquee el sitio de restricción Aar I, de tal manera que la digestión de los fragmentos elimine el sitio de reconocimiento y genere salientes complementarios que pueden ligarse sin problemas para crear una unión que carece del sitio original. El kit incluye un vector de destino, denominado pTipo IIs, que está optimizado para este enfoque.

Eficacia, flexibilidad y precisión de la clonación
Con el kit de ensamble de tipo IIs GeneArt®, los principales factores que influyen en la eficacia de la clonación son el tamaño de los elementos de ADN, el tamaño total de la molécula final ( 10 kb) y la calidad y especificidad del fragmento.

Las eficacias de clonación típicas para cantidades diferentes de fragmentos clonados en pRTipo IIs son las siguientes:

• > 95 % para 5 fragmentos de 1 kb cada uno
• > 60 % para 8 fragmentos de 1 kb cada uno
• > 85 % para 2 fragmentos idénticos de 1 kb cada uno

Soporte de diseño para clonación en sílice
Un paso clave en la clonación de tipo IIs GeneArt® es el diseño correcto de fragmentos y oligonucleótidos con los sitios de reconocimiento y el espaciado adecuados para ayudarle a garantizar el ensamble exitoso de su clon. Con el fin de simplificar y acelerar el proceso de diseño, proporcionamos una herramienta de diseño de primers y construcciones GeneArt® para ayudarle a diseñar su experimento en sílice. La herramienta recomienda el kit GeneArt® correcto para su ensamble, comprueba la compatibilidad del diseño experimental con las especificaciones del producto, diseña oligonucleótidos de ADN si es necesario y ofrece al usuario una representación gráfica del vector, así como una secuencia anotada descargable en formato GenBank, compatible con el software VectorNTI®.

Otros productos recomendados:

• Kit de clonación de PCR Zero Blunt® TOPO®, sin células competentes (n.º de referencia 450245)
• Kit de clonación de PCR Zero Blunt® TOPO®, con E. coli químicamente competente One Shot® TOP10 (n.º de referencia K280020)
• Células resistentes al fago T1 One Shot® MAX Efficiency™ DH10B™ (n.º de referencia cat. 12331-013).