Alexa Fluor™ 532NHS Ester (ester succinimidyle)

Alexa Fluor® 532 est un colorant brillant jaune avec un niveau d’excitation parfaitement adapté à la ligne laser Nd:YAG à fréquence doublée. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie de flux, le colorant Alexa Fluor® 532 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. En plus de formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor® 532 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules (en savoir plus).

L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de l’Alexa Fluor® 532 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH₂) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Le conjugué Alexa Fluor® résultant présentera une fluorescence plus lumineuse et une photostabilité plus élevée que les conjugués d’autres fluorophores similaires sur le plan spectral.

Informations détaillées concernant cet ester NHS AlexaFluor® :

Étiquette fluorophore : Colorant Alexa Fluor® 532
Groupe réactif : Esters NHS
Réactivité : Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
Ex / Em du conjugué : 530/555 nm
Coefficient d’extinction : 81 000 cm-1M-1
Poids moléculaire : 723,8

Réaction de conjugaison typique
Vous pouvez conjuguer des réactifs amino-réactifs avec pratiquement n’importe quel(le) protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.

L’ester NHS Alexa Fluor® est typiquement dissous dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.

Purification de conjugué
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant Alexa Fluor® libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel® P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
Kit de purification de conjugués d’anticorps pour 0,5-1 mg (A33086)
Kit de purification de conjugués d’anticorps pour 20-50 μg (A33087)
Kit de purification de conjugués d’anticorps pour 50-100 μg (A33088)

En savoir plus sur l’étiquetage des protéines et des anticorps
Nous proposons une large sélection de kits de marquage des anticorps et des protéines Molecular Probes® pour s’adapter à votre matériau de départ et à votre configuration expérimentale. Consultez nos kits de marquage d’anticorps ou utilisez notre outil de sélection de chimie de marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits de marquage, lisez Kits pour le marquage de protéines et d’acides nucléiques—, section 1.2 dans le manuel Molecular Probes®.

Nous vous préparerons un conjugué sur mesure
Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous vous préparerons un conjugué d’anticorps ou de protéines sur mesure. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel, et nous croyons en la qualité de notre travail. Nous sommes certifiés ISO 9001:2000.