GeneArt™ Synechococcus Protein Expression Vector

Der GeneArt™ Synechococcus-Proteinexpressionsvektor ist unser Synechococcus-Proteinexpressionsvektor der zweiten Generation, der für die relativ hohe Expression in Algen optimiert ist, und mit zwei Protein-Tags für den Nachweis und/oder die Aufreinigung Ihres Gens von Interesse ausgestattet ist. Das Kit umfasst Expressionsvektor und einfach zu befolgende Protokolle. Unser Gibco™ BG-11-Medium ist separat erhältlich und optimiert für das Wachstum und die Haltung ausgewählter Cyanobakterien, einschließlich Synechococcus elongatus aus der ATCC-Kollektion.

• Expression von > 10 % an gesamtlöslichem Protein Ihres Gens von Interesse
• Nachweis und Aufreinigung Ihres Gens von Interesse mit 6His-TEV- und/oder V5-His-Epitop-Tags
• Kompatibel mit nahtloser Assemblierung für den Aufbau von Konstrukten

Ein spezifischer Expressionsvektor
Der GeneArt Synechococcus-Proteinexpressionsvektor wurde entwickelt, um eine konstitutive Expression in Synechococcus elongatus zu ermöglichen. Die Expression wird vom Promotor psbA1, einer Ribosomenbindungsstelle (RBS), und optionalen Start- und Stopcodons abhängig von der Genposition gesteuert. Der Vektor bietet Aufreinigungs- und Nachweis-Tags am N- und C-Terminus: ein N-terminales Polyhistidin-Tag mit einer TEV-Erkennungsstelle für optionale Spaltung und ein C-terminales V5-Epitop, gefolgt von einem Polyhistidin-Tag. Zwei MCS-Positionen bieten die Flexibilität, entweder eines der beiden, beide oder keine Tags an Ihr Protein anzuheften. Unser pSyn_6-Vektor ist auch mit der nahtlosen Klonierung kompatibel, einer optionalen Klonierungsmethode, die keine zusätzlichen Sequenzen in Ihrem endgültigen Konstrukt zur Folge hat.

Zu den Merkmalen des Vektors gehören:
• Stark konstitutiver Promotor, psbA1, für die robuste Expression des rekombinanten Gens von Interesse
• Ribosomenbindungsstelle (RBS) für die verbesserte Expression einiger Gene
• Gezielte Integration Ihres Gens von Interesse in das Genom von Synechococcus elongatus
• N-terminale 6His-TEV- und C-terminale V5-6His-Epitop-Tags
• Spectinomycin-Resistenzgen für die Selektion in Synechococcus
• Flexibler Vektor mit multiplen Klonierungsstellen

> 80 % Integrationseffizienz
Die Transformation von Synechococcus elongatus PCC7942 beruht auf homologer Rekombination zwischen dem Chromosom der Zelle und exogener DNA, die nicht autonom repliziert wird und Sequenzen enthält, die homolog zum Chromosom sind. Der Standort der Integration in das Chromosom (neutraler Standort, NS1) wurde als Klonierungs-Locus entwickelt, da er ohne Aberrationen des Phänotyps unterbrochen werden kann, wodurch eine Rekombination von ektopischen Sequenzen ermöglicht wird. Bei der Transformation mit Vektoren, die eine Antibiotika-Resistenzkassette und neutrale Standortsequenzen enthalten, tritt ein doppeltes, homologes Rekombinationsereignis zwischen dem Vektor des neutralen Standorts und dem Chromosom von Synechococcus elongatus auf. Der selektive Marker (Spectinomycin) und das von einem Promotor angetriebene Gen von Interesse werden am neutralen Standort eingefügt, und das Vektor-Backbone (pUC) geht verloren, was die Expression rekombinanter Gene in Synechococcus elongatus PCC 7942 ermöglicht.

Gibco BG-11-Medium – optimiert für Cyanobakterien
Gibco BG-11-Medium ist separat erhältlich und optimiert für das Wachstum und die Haltung ausgewählter Cyanobakterien, einschließlich Synechococcus elongatus. Mit der 1x-Formulierung vermeiden Sie mühsame Medienherstellungsschritte. Die ausgezeichnete Flasche bietet eine einfachere Verwendung im Biosicherheitsschrank. Dies minimiert das Kontaminationsrisiko und hilft Ihnen, Zellkulturen konsistenter durchzuführen. Die hochwertige Verpackung und Qualität, die höhere Zuverlässigkeit und die verbesserte Konsistenz ergeben in der Cyanobakterien-Kultur eine bessere Gesamteffizienz und robustere Daten.