Kit de diferenciación de neuronas dopaminérgicas de PSC

El kit de diferenciación de neurona dopaminérgica Gibco™ PSC es un sistema de medios de cultivo que permite la diferenciación de células madre pluripotentes humanas (hPSC) en neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo funcionales. A diferencia de otros métodos de diferenciación de hPSC en neuronas dopaminérgicas, que pueden ser largos, mal definidos y producir un fenotipo biológicamente irrelevante, el kit de diferenciación de neurona dopaminérgica PSC le permite diferenciar hPSC en neuronas dopaminérgicas auténticas del mesencéfalo con mayor velocidad y escalabilidad sin precedentes, todo mientras mantiene el fenotipo adecuado del mesencéfalo.

El kit es un sistema de tres pasos utilizado durante 35 días, con componentes que se agregan secuencialmente para especificar las PSC a la placa de piso del mesencéfalo, expandir las células progenitoras de la placa de piso y diferenciar las células progenitoras de la placa de piso en neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo funcionales. Cada componente se somete a pruebas de rendimiento para asegurar la generación del fenotipo correcto, y las neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo se han sometido a pruebas funcionales para determinar la capacidad de producir un potencial de acción espontánea y la liberación de dopamina en la despolarización.

Paso 1: Especificación de las PSC en las células de la placa del piso del mesencéfalo
Durante el desarrollo del sistema nervioso central, las neuronas dopaminérgicas del mesencénfalo se derivan de una población distinta de células llamadas células de la placa del suelo del mesencéfalo, que se forman durante los días 21–28 de gestación y se localizan a lo largo de la línea media ventral del tubo neural en desarrollo. Informes recientes se han centrado en la importancia de diferenciar los hPSC en células de esta región, en lugar de utilizar una población de células madre neurales más genérica, para crear neuronas dopaminérgicas auténticas del mesencéfalo. El primer paso en la creación de neuronas dopaminérgicas utilizando el kit de diferenciación de neurona dopaminérgica PSC es la especificación de las hPSC en células progenitoras de placas de suelo (FP) especificadas en el cerebro medio en el medio de especificación de placas de suelo completas.

Paso 2: Crear una población válida de células progenitoras de placas de suelo
Los métodos estándar para crear neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo implican protocolos largos que son continuos y no ampliables. Con el kit de diferenciación de neuronas dopaminérgicas PSC, se crea un banco viable de células progenitoras de placas de suelo que mantienen la identidad del mesencéfalo.

La capacidad de crear un banco de células progenitoras en este paso permite:
• Un aumento significativo en la pureza resultante de la neurona DA
• La capacidad de escalar los experimentos más allá de los límites actuales
• La capacidad de distribuir células entre pares o descongelarlas para su uso posterior

Paso 3: Diferenciación de las células precursoras de las placas de suelo a neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo
El último paso del protocolo del kit de diferenciación de neuronas dopaminérgicas del PSC implica la diferenciación de las células progenitoras de placas de suelo en neuronas dopaminérgicas del mesencéfalo. Se ha demostrado que las neuronas dopaminérgicas generadas durante este paso mantienen la identidad del cerebro medio, exhiben un perfil de expresión génica equivalente al de las neuronas generadas usando protocolos publicados, y exhiben funcionalidad como se muestra por el potencial de acción espontánea y la liberación de dopamina al despolarizar.