SILAC Protein Quantitation Kit (Trypsin), DMEM

Das Thermo Scientific SILAC Proteinquantifizierungskit (Trypsin), DMEM, wird zur spezifischen Analyse der Proteinexpression durch Massenspektrometrie unter Verwendung einer stabilen Isotopenmarkierung mit Aminosäuren in der Zellkultur (SILAC) verwendet.

Merkmale des SILAC Proteinquantifizierungskits, DMEM:
• Effizient – bis zu 100 % Markierungsintegration in Proteine lebender Zellen
• Reproduzierbar – minimiert intra-experimentelle Variabilität durch unterschiedliche Probenvorbereitung
• Flexibel – vollständigere Proteomabdeckung durch doppelte Aminosäure-Isotopenmarkierung dank an L-Lysin und L-Arginin armer Medien
•Kompatibel – Markierung von in zahlreichen Säugetierzellen exprimierten Proteinen, die für ein Wachstum im DMEM-Medium angepasst wurden, inkl. HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat und andere
• Hochwertige Supplemente – schwere Aminosäuren mit >99 % Isotopenreinheit; Sterilität, Endotoxin-Freiheit und Zellkultur-Kompatibilität gewährleistet durch dialysiertes FBS

Anwendungen des SILAC Proteinquantifizierungskits:
• Quantitative Analyse der relativen Veränderungen der Proteinabundanz bei verschiedenen Zellbehandlungen
• Quantitative Analyse von Proteinen, für die keine Antikörper verfügbar sind
• Proteinexpressions-Profiling zur Untersuchung normaler vs. kranker Zellen
• Identifizierung und Quantifizierung von Hunderten bis Tausenden von Proteinen in einem einzigen Experiment

SILAC ist eine leistungsstarke Methode zur Identifizierung und Quantifizierung relativer differenzieller Veränderungen in komplexen Proteinproben. Dieser Ansatz umfasst die In-vivo-metabolische Integration von „schweren“ ¹³C- oder ¹⁵N-markierten Aminosäuren in Proteine, gefolgt von der Massenspektrometrie (MS) zur beschleunigten und umfassenden Identifizierung, Charakterisierung und Quantifizierung von Proteinen.

Da Peptide, die mit schweren und leichten Aminosäuren gekennzeichnet sind, chemisch identisch sind, koeluieren sie während der Umkehrphase der Säulenvorfraktionierung und werden daher während der MS-Analyse gleichzeitig erkannt. Die relativen Spitzenintensitäten mehrerer isotopisch unterschiedlicher Peptide aus jedem Protein werden dann verwendet, um die durchschnittliche Änderung der Proteinreichität in der behandelten Probe zu bestimmen.

Trypsin SILAC-Kits werden mit ¹³C₆ ¹⁵₂ L-Lysin-2HCl und ¹³C₆ ¹⁵N₄ L-Arginin-HCl geliefert, um lysinhaltige und argininhaltige Peptide aus Trypsin-Proteinverdau zu kennzeichnen und zu quantifizieren. Jedes Kit enthält außerdem 2 x 500 ml Medium und dialysiertes Serum. In Kombination mit Thermo Scientific Protein-/Peptidprobenanreicherungsprodukten ermöglichen SILAC-Proteinquantifizierungskits auch die MS-Analyse niedrig-abundanter Proteine, wie Zelloberflächenproteine, organellspezifische Proteine und post-translationale Proteinmodifikationen wie Phosphorylierung oder Glykosylierung.

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