Alexa Fluor™ 488 TFP ester

Los tintes Alexa Fluor™ son moléculas reactivas que se pueden utilizar para añadir una etiqueta fluorescente a las aminas primarias (R-NH2) de proteínas, oligonucleótidos modificados con aminas y otras moléculas que contienen aminas. Los conjugados Alexa Fluor™ resultantes mostrarán una fluorescencia más brillante y mayor fotoestabilidad que los conjugados de otros fluoróforos espectralmente similares. El éster TFP Alexa Fluor™ 488 produce un conjugado con excitación/emisión de 495/515 nm que es espectralmente similar a los conjugados de fluoresceína (FITC) y Cy2.

Los tintes Alexa Fluor™ están disponibles con emisiones de fluorescencia que abarcan el espectro visible y cercano al infrarrojo (ver Serie de tintes Alexa Fluor™: Nota 1.1 en el manual de Molecular Probes™) y proporcionan la combinación única de solubilidad en agua e insensibilidad al pH entre pH 4 y 10 para la compatibilidad en diversos entornos biológicos.

Los ésteres TFP (tetrafluorofenil) son una mejora sobre la química del éster succinimidilo (SE o éster NHS) que se utiliza típicamente para unir fluoróforos o haptenos a las aminas primarias de biomoléculas. Ambas sustancias químicas reactivas producen un enlace de amida resistente entre el colorante o el hapteno y el compuesto de interés, pero los ésteres de TFP son menos susceptibles a la hidrólisis espontánea durante las reacciones de conjugación. Los ésteres TFP Alexa Fluor™ son estables durante varias horas al pH básico que se utiliza típicamente para la reacción: los ésteres succinimidilo más duraderos.

Reacción de conjugación típica
Puede conjugar reactivos que reaccionan a aminas con prácticamente cualquier proteína o péptido; el protocolo proporcionado está optimizado para anticuerpos IgG. Puede ampliar la reacción para cualquier cantidad de proteína, pero la concentración de la proteína debe ser al menos de 2 mg/ml para obtener unos resultados óptimos. Recomendamos probar tres grados de etiquetado distintos, utilizando tres proporciones molares diferentes del reactivo en la proteína.

El éster TFP Alexa Fluor™ suele disolverse en dimetilsulfóxido anhidro (DMSO) (D12345) de alta calidad, y la reacción se lleva a cabo en un tampón de bicarbonato sódico de 0,1–0,2 M, pH 8,3, a temperatura ambiente durante una hora. Dado que la pKa de la amina terminal es inferior a la del grupo amino épsilon de lisina, puede realizar un etiquetado más selectivo de la terminal amina mediante un tampón más cercano al pH neutro.

Purificación del conjugado
Los anticuerpos etiquetados se separan normalmente del tinte Alexa Fluor™ mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalentes. Para proteínas mucho más grandes o más pequeñas, seleccione un medio de filtración en gel con un punto de corte de peso molecular adecuado o purifique mediante diálisis.

Obtenga más información acerca del etiquetado de proteínas y anticuerpos
Ofrecemos una amplia selección de kits de etiquetado de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se ajustan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte Antibody Labeling from A to Z (Etiquetado de anticuerpos de la A a la Z) o utilice nuestra herramienta de selección química de etiquetado para otras opciones. Para obtener más información acerca de nuestros kits de etiquetado, consulte Kits para marcado de proteínas y ácidos nucleicos, Sección 1.2 del manual Molecular Probes™.

Personalizamos el conjugado que desee
Si no encuentra lo que busca en nuestro catálogo en línea, le prepararemos el conjugado de anticuerpos o proteínas personalizado que desee. Nuestro servicio de conjugación a medida es eficaz y confidencial, y tenemos el certificado ISO 9001:2000.