Pro-Detect™ Rapid Antibody Isotyping Assay Kit, mouse

Das Thermo Scientific Pro-Detect Antikörperisotypisierungs-Schnellassaykit – Maus besteht aus einem Satz Lateral-Flow-Einwegmessstäbe zum schnellen, einfachen Nachweis monoklonaler Maus-Antikörperklassen und -unterklassen. Der Antikörperisotypisierungs-Assay verwendet membranbasierte Streifen, die mit farbstoffgebundenen konjugierten Antikörpern beschichtet sind und innerhalb von zehn Minuten eine sichtbare Farbanzeige des monoklonalen Antikörperisotyps liefern. Das Kit bestimmt Maus-IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM sowie die Leichtkettenidentität (Kappa vs. Lambda-Leichtketten).

Merkmale des Pro-Detect Antikörperisotypisierungs-Schnellassaykits:
• Lange Haltbarkeit—stabil für min. ein Jahr bei 4 °C
• Einfacher Arbeitsablauf—Verdünnung der Antikörperprobe mit dem mitgelieferten Verdünnungsmittel und Eintauchen des Lateral-Flow-Teststreifens
• Schnell—innerhalb von 5–10 Minuten zeigt ein Streifen den Antikörperisotopen an
• Empfindlich—Nachweis von Antikörpern in Gewebekulturmedien oder Aszites-Flüssigkeitsproben mit einer Konzentration von nur ng/ml
• Spezifisch—der Assay erzeugt keine Kreuzreaktion mit fötalem Kälberserum (FBS)
• Zuverlässig—die Ergebnisse sind ähnlich wie bei standardmäßigen ELISA-basierten Isotypisierungs-Assays

Jeder Pro-Detect Antikörperisotypisierungs-Schnellassay erfolgt durch einfaches Hinzufügen eines korrekt verdünnten Gewebekulturüberhangs oder einer Maus-Aszitesprobe in ein Reagenzglas oder die Vertiefung einer Mikrotiterplatte und Eintauchen eines Lateral-Flow-Teststreifens. Die in die Streifenmembran eingebetteten Goldkonjugate bilden spezifische, in Klassen oder Unterklassen lösliche Komplexe mit den Antikörpern in der Probe. Diese Komplexe bewegen sich entlang der Membran, bis sie auf die Anti-Isotyp- und Klassen-spezifischen Antikörper der imprägnierten Membranregionen treffen. Die Ergebnisse werden als roter Streifen über der aufgedruckten Klassen- oder Unterklassenbeschreibung angezeigt, die das Vorhandensein des Antikörperisotyps anzeigt.

Die Bestimmung der Klasse und Unterklasse eines monoklonalen Antikörpers ist bei der Planung der besten Immunglobulin-Aufreinigungsmethode nützlich. Beispielsweise werden Maus-IgA und -IgM am besten nach der Größe (d. h. Gelausschluss) oder mittels Immunaffinitäts-Trennsäulen gereinigt. Maus-IgG2a und IgG2b werden mit Protein A bei pH 7–8 gereinigt. Maus-IgG1 bindet dagegen am besten an Protein A bei pH 8–9. Immunoglobulin mit leichten Kappa-Ketten kann mit immobilisiertem Protein L aufgereinigt werden.

Das Pro-Detect Antikörperisotypisierungs-Schnellssaykit ist sowohl mit dem Überstand der Gewebekultur als auch mit der Maus-Aszitesflüssigkeit kompatibel und empfindlicher als herkömmliche Latexperlen-basierte Messstabassays und viel schneller als ELISA-basierte Isotypisierungsassays. Das Kit erfordert nur 0,5 µl Aszites-Flüssigkeit, 2 – 22 µl Zellkulturüberstand oder 1,5 ng aufgereinigte Antikörper.