Pro-Detect™ Rapid Antibody Isotyping Assay Kit, rat

Das Thermo Scientific Pro-Detect Antikörperisotypisierungs-Schnellassaykit – Ratte besteht aus einem Satz Lateral-Flow-Einwegmessstäbe zum schnellen, einfachen Nachweis monoklonaler Ratten-Antikörperklassen und -unterklassen. Der Antikörperisotypisierungs-Assay verwendet membranbasierte Streifen, die mit farbstoffgebundenen, konjugierten Antikörpern beschichtet sind und innerhalb von zehn Minuten eine sichtbare Farbanzeige des monoklonalen Antikörperisotyps liefern. Das Kit bestimmt Ratten-IgG1, IgG2a, IgG2b und IgG2c.

Merkmale des Pro-Detect Antikörperisotypisierungs-Schnellassaykits:
• Lange Haltbarkeit – stabil für min. ein Jahr bei 4 °C
• Einfacher Arbeitsablauf – Verdünnung der Antikörperprobe mit dem mitgelieferten Verdünnungsmittel und Eintauchen des Lateral-Flow-Teststreifens
• Schnell – innerhalb von 5 – 10 Minuten zeigt ein Streifen den Antikörperisotypen an
• Empfindlich – Nachweis von Antikörpern in Gewebekulturmedien oder Aszites-Flüssigkeitsproben mit einer Konzentration von nur wenigen ng/ml
• Spezifisch – der Assay erzeugt keine Kreuzreaktion mit fötalem Kälberserum (FBS)
• Zuverlässig – die Ergebnisse sind ähnlich wie bei standardmäßigen ELISA-basierten Isotypisierungs-Assays

Jeder Pro-Detect Antikörperisotypisierungs-Schnellassay erfolgt durch einfaches Hinzufügen eines korrekt verdünnten Gewebekulturüberhangs oder einer Maus-Aszitesprobe in ein Reagenzglas oder die Vertiefung einer Mikrotiterplatte und Eintauchen eines Lateral-Flow-Teststreifens. Die in die Streifenmembran eingebetteten Goldkonjugate bilden spezifische, in Klassen oder Unterklassen lösliche Komplexe mit den Antikörpern in der Probe. Diese Komplexe bewegen sich entlang der Membran, bis sie auf die Anti-Isotyp- und Klassen-spezifischen Antikörper der imprägnierten Membranregionen treffen. Die Ergebnisse werden als roter Streifen über der gedruckten Klassen- oder Unterklassenbeschreibung angezeigt, die den vorhandenen Antikörperisotypen angibt.

Bei der Auswahl der besten Aufreinigungsmethode muss unbedingt die Unterklasse eines Ratten-Antikörpers bestimmt werden. IgG2a, IgG2b und IgG2c können mit Protein-A-Säulen bei einem pH-Wert von 7–8 aufgereinigt werden. IgG1-Isotypen binden am besten an Protein A bei einem etwas höheren pH-Wert von 8–9.

Das Pro-Detect Antikörperisotypisierungs-Schnellassaykit ist sowohl mit dem Überstand von Gewebekulturen als auch mit der Aszites-Flüssigkeit kompatibel und empfindlicher als herkömmliche Latexperlen-basierte Messstabassays und viel schneller als ELISA-basierte Isotypisierungsassays. Das Kit erfordert nur 0,5 µl Aszites-Flüssigkeit, 2 – 22 µl Zellkulturüberstand oder 1,5 ng aufgereinigte Antikörper.