No-Stain™ Proteinmarkierungsreagenz

Das Invitrogen No-Stain Proteinmarkierungsreagenz bietet eine flexible, genaue, schnelle und zuverlässige Methode zur Visualisierung und Normalisierung von Proteinen in einem Gel oder auf einer Membran (nach dem Transfer). Es bildet innerhalb von 10 Minuten kovalente Bindungen zu Proteinen in Gelen oder auf Membranen, benötigt keine Entfärbungsschritte und kann mit jedem gängigen Bildgeber sofort visualisiert werden. Das No-Stain Reagenz erfordert keine speziellen Gele oder andere Reagenzien und ist mit Gelfärbungen und Western-Abläufen kompatibel.

Sofortige Visualisierung von Proteinen in Gelen
Coomassie und anderen Gelfärbungs- und Entfärbungsschritte können sehr zeitaufwändig und umständlich sein. Das No-Stain Proteinmarkierungsreagenz bildet innerhalb von 10 Minuten kovalente Bindungen mit den Lysin-Aminosäure-Seitenketten an allen Proteinen in einem Gel. Da Lysin eine der am häufigsten vorkommenden Aminosäuren ist, ermöglicht das Färbereagenz den Nachweis aller Proteine in einem Gel oder auf einer Membran, und die starke Signalabgabe des kovalent gebundenen Reagenz sorgt für eine Empfindlichkeit auf Nanogrammebene.

• Alternative zu herkömmlichen Gel-Färbereagenzien—Ermöglicht eine genauere Normalisierung über einen breiten Bereich von Proteinlysatkonzentrationen (1–80 µg)
• Empflindlich—Niedrige Nachweisgrenze von 20 ng pro Band
• Spezifisch—Bildet Verbindungen nur mit den Lysin-seitigen Proteinketten. Ungebundenes Reagenz emittiert nicht und ermöglicht so ein hervorragendes Signal-Rausch-Verhältnis
• Flexibel — Kein Gelaustausch für den Komfort von ungefärbtem Material erforderlich. Das No-Stain Reagenz ermöglicht die bequeme farbfreie Bearbeitung aller Geltypen (vorgefertigte oder selbst vorbereitete Gele)

Goldstandard bei quantitativem Western Blotting
Proteinnormalisierung ist ein entscheidender Schritt für ein zuverlässiges und reproduzierbares quantitatives Western Blotting. Die Gesamtproteinnormalisierung gilt als Goldstandard für das quantitative Western Blotting. Viele führende Zeitschriften haben Richtlinien für das Einreichen der Western-Blotting-Forschung entwickelt, von denen einige nachfolgend aufgeführt sind.

• “Für quantitative Vergleiche sollten geeignete Reagenzien, Kontrollen und Bildgebungsverfahren mit linearen Signalbereichen verwendet werden” – Natur
• “Aufzeichnung der Datenerfassung, Linearität der Signalintensität mit der Antigenbeladung und Normalisierung der Proteinbeladung” – Journal of Biological Chemistry
• “Normalisierung der Signalintensität auf die Gesamtproteinladung (bewertet durch Einfärbung der Membranen für Gesamtprotein), wann immer möglich” – Journal of Biological Chemistry
• “Haushaltsproteine sollten zur Normalisierung nicht verwendet werden, wenn nicht belegt ist, dass die Manipulationen die Expression nicht beeinflussen” – Journal of Biological Chemistry

Eine genaue Belastungskontrolle sollte unter allen experimentellen Bedingungen ein lineares Verhältnis zwischen Signalintensität und Probenlast aufweisen. Die Signalintensität, die durch die Markierung von Gesamtproteinen auf einer Membran mit No-Stain Reagenz erzielt wird, gewährleistet unter allen experimentellen Bedingungen ein lineares Verhältnis zwischen Signalintensität und Probenlast (siehe Abbildung unten). Daher ermöglicht die Verwendung von No-Stain Reagenz im quantitativen Western Blotting die Verwendung von Gesamtprotein als eine ideale Beladungskontrolle.

• Anwenderfreundliches Protokoll: Markierung von Proteinen auf Nitrozellulose- oder PVDF-Membranen in nur 10 Minuten
• Schnelle Visualisierung: mit unterschiedlichsten Bildgebungsgeräten auf der Basis von UV- oder Fluoreszenzlichtquellen
• Präzise Gesamtproteinnormalisierung: Der breite lineare Proteinnachweisbereich von 1 bis 80 μg ermöglicht den Nachweis von No-Stain-Signalen sowie von Signalen des Zielproteins für eine präzise Gesamtproteinnormalisierung.
• Hohe Empfindlichkeit und Stabilität: Empfindlichkeit im Nanogrammbereich und hohe, mit nachgelagerten Immundetektionsschritten kompatible Signalstabilität
• Erstklassige Analyse: Haushaltsproteine sind anfällig für Signalsättigung und sonstige biologische Schwankungen, die bei Verwendung des No-Stain-Reagenz bei der Gesamtproteinnormalisierung nicht entstehen.

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