mMESSAGE mMACHINE™ T7 ULTRA Transkriptionskit

Das mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra Kit kombiniert ein neues Cap-Analogon, das Anti-Reverse-Cap-Analogon (ARCA), mit einer patentierten ertragreichen Transkriptionstechnologie zur Generierung von RNA-Transkripten, um höhere Proteinerträge im Vergleich zu anderen Transkripten bei der Translation zu erzielen. Vorteile des mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra Kits:

• Synthetisieren Sie mehr Protein aus in-vitro transkribierter RNA
• Exprimieren Sie RNA-Transkripte effizienter sowohl in-vitro als auch in-vivo
• Stabilisieren Sie Transkripte in vivo mit den enthaltenen Reagenzien für Poly(A)-Tailing

ARCA-gecappte RNA ist translational aktiver
Eine Basismodifikation in ARCA führt nur zu ihrer Einbindung in die funktionale, für die Translation geeignete Ausrichtung; herkömmliche Cap-Analoga können sowohl in funktionale als auch in nicht-funktionale Ausrichtungen integriert werden. Als Ergebnis erbringt die Integration des ARCA in Transkriptionsreaktionen Erträge bei gecappten RNAs, die zu 100 % für die Translation geeignet sind. Dies wird durch die Integration von Poly(A)-Enden in mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra Transkripte weiter verstärkt. Experimente, bei denen ARCA- und ARCA/poly(A)-Transkripte mit Enden mit Cap-Analogona- und Cap-Analoga/poly(A)-Transkripten mit Enden verglichen werden, zeigen höhere Konzentrationen der Proteinsynthese bei ARCA-gecappter RNA an.

Was ist ARCA?
ARCA ist ein modifiziertes Cap-Analogon, bei dem die 3'-OH-Gruppe (näher an m⁷G) durch OCH₃ ersetzt wird (siehe Schema). Aufgrund dieser Substitution kann die RNA-Polymerase nur die Transkription mit der restlichen Hydroxylgruppe einleiten, und somit die ARCA-Integration in die Vorwärtsausrichtung erzwingen. Infolgedessen sind 100 % der am 5'-Ende mit ARCA synthetisierten Transkripte zur Translation geeignet, was einen stark stimulierenden Effekt auf die Translation hat.

Das richtige Verschließen von in vitro transkribierter RNA
Das richtige Verschließen von RNA fördert die korrekte Einleitung der Proteinsynthese sowie die Stabilität und Verarbeitung von mRNA in vivo. Nicht gecappte RNA wird nach Mikroinjektion oder Transfektion in Zellen durch zelluläre RNasen rasch abgebaut. Gecappte RNA wird in der Regel auch effizienter in In-vitro--Translationssysteme übersetzt. Dadurch werden RNAs mit Cap-Analogon erzeugt, das nur in funktioneller Ausrichtung integriert wird. Daher führt die Substitution eines herkömmlichen Cap-Analogons durch ARCA zur Synthese von gecappten RNAs, die zu 100 % für die Translation geeignet sind.