RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE

Description

Le kit d’isolement de l’acide nucléique total RecoverAll™ pour FFPE est destiné à l’extraction de l’acide nucléique total à partir de tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE). Des réactifs sont inclus en quantité suffisante pour 40 purifications à partir de quatre sections de 20 µm maximum ou jusqu’à 35 mg de carottes de forage non sectionnées chacune. Caractéristiques du kit d’isolement de l’acide nucléique total RecoverAll™ pour FFPE :

• Optimisé pour l’isolement d’acides nucléiques totaux, notamment des microARN, à partir de tissu FFPE
• Aucune digestion de protéinase K requise pendant la nuit, procédez à la déparaffination dans la matinée et à la qRT-PCR dans l’après-midi
• Rendements typiques : > 50 %à celui des tissus non fixés
• Les acides nucléiques récupérés conviennent au séquençage de nouvelle génération, à la PCR en temps réel, à la PCR, au screening de mutations et aux analyses de microréseaux

Extraction d’acides nucléiques à partir d’échantillons difficiles
Les échantillons tissulaires archivés contiennent des informations précieuses sur les états pathologiques. Ceci dit, il est normalement difficile d’isoler des acides nucléiques de ces échantillons, dont la qualité serait suffisante pour une analyse moléculaire. Les techniques de préservation standard utilisent la formaline pour maintenir la structure tissulaire et empêcher la putréfaction. Ceci dit, la formaline piège également les acides nucléiques et les modifie par des réticulations entre protéine et protéine, et entre protéine et acide nucléique. L’ARN (et en partie l’ADN) est souvent si fragmenté et chimiquement modifié qu’il est incompatible avec de nombreuses techniques d’analyse moléculaire. La fragmentation d’ARN dans les tissus FFPE ne peut pas être inversée. Cependant, les conditions de digestion de la protéase dans le kit RecoverAll™ sont conçues pour libérer une quantité optimale (voir la figure) de fragments d’ARN piégés de toutes tailles, notamment le microARN, en un temps relativement bref.

Solution du kit d’isolement de l’acide nucléique total RecoverAll™
La procédure du kit d’isolement de l’acide nucléique total RecoverAll™ exige environ 45 minutes de manipulation et peut généralement être réalisée en moins d’un jour pour l’ARN. Les échantillons FFPE sont déparaffinés à l’aide d’une série de lavages au xylène et à l’éthanol. Ils sont ensuite soumis à une digestion approfondie de la protéase avec une durée d’incubation adaptée à la récupération de l’ARN ou de l’ADN. Les acides nucléiques sont ensuite purifiés par filtration rapide en verre, et élués dans de l’eau ou un tampon hyposodé.

Acides nucléiques pour quasiment n’importe quelle application en aval
Comme avec tous les tissus FFPE, la fixation et le stockage des échantillons occasionnent généralement une fragmentation et une modification de l’acide nucléique. C’est pourquoi des applications en aval, comme l’analyse de microréseaux, qui exigent plus d’ARN en parfait état que la qRT-PCR, peuvent exiger une modification pour des résultats optimaux. Bien que l’ADN ne fasse généralement pas l’objet d’une fragmentation aussi facile que l’ARN, il semble être plus réactif que la formaline et nécessite une durée de digestion par la protéase plus longue (2 jours) pour libérer des quantités substantielles d’ADN.

Figures

Spécifications

Sample Type (General):	FFPE & Fixed Samples
High Throughput Compatibility:	Not High Throughput-Compatible (Manual)
Downstream Application:	Next-Generation Sequencing, Northern Blotting, PCR, Real-Time Quantitative PCR (qPCR), Reverse Transcriptase PCR (RT-PCR), Southern Blotting, cDNA Library Construction, microRNA Analysis
Final Product:	Genomic DNA, Total RNA, micro RNA
Isolation Technology:	Spin Column (Glass Fiber Filter)
Product Line:	Ambion™, RecoverAll™
Product Size:	40 preps
Starting Material (Amount):	Up to 35 mg of unsectioned core samples, Up to four 20 µm sections
Yield (up to):	24 µg

Contenu et stockage