Ambion™ DNase I (RNase-frei)

Ambion DNase I (RNase-frei) (E.C. 3.1.21.1) ist eine unspezifische Endonuklease, die doppel- und einsträngige DNA sowie Chromatin abbaut. Sie erzielt ihre Wirkung durch Hydrolisierung von Phosphodiester-Verbindungen und erzeugt Mono- und Oligonukleotide mit einer 5'-Phosphat- und einer 3'-Hydroxyl-Gruppe. RNase-freie DNase I ist hochgradig rein erhältlich und wird zum Abbau von DNA bei Vorhandensein von RNA empfohlen, wenn keine RNase vorhanden sein darf, damit die Integrität der RNA aufrechterhalten wird. So wird DNase I zum Beispiel häufig zum Entfernen von Template-DNA nach einer In-vitro--Transkription sowie zum Entfernen verunreinigender DNA in Gesamt-RNA-Präparaten (insbesondere solche aus transfizierten Zellen, die Plasmid-DNA enthalten können), die für Assays zum Schutz von Ribonuklease, die Kontraktion von cDNA-Bibliotheken und die RT-PCR eingesetzt werden. DNase I benötigt zweiwertige Kationen (Mg²⁺ und Ca²⁺ bei ca. 5 mM bzw. 0,5 mM) für maximale Aktivität und hat ein pH-Optimum von 7,8.

RNase-freie DNase I schlägt die Produkte der Konkurrenz
Ein Forschungsbericht in BioTechniques (Matthews et al., 32: 1412-1417, 2002) verglich die RNase-Kontamination in DNase I-Präparaten von Sigma, Roche, Applied Science, Qiagen und Ambion. Die Ergebnisse zeigten, dass “...mit Ausnahme von Ambion™ RNase-freier DNase I die Integrität der cRNA aus In-vitro--Transkriptionsreaktionen beeinträchtigt wurde und immer noch mit DNA kontaminiert war. Ambion™ DNase wurde für die restlichen Versuche verwendet, die eine DNase-Aufspaltung erforderten.” Ambion™ DNase I wird auf kontaminierende RNase- und Protease-Aktivität getestet. Die Funktionalität wird durch die Verdauung der menschlichen genomischen DNA bestimmt, gefolgt von einer quantitativen Echtzeit-PCR zur Erkennung unverdauter DNA.

Definition einer Einheit
Eine Einheit ist die Enzymmenge, die erforderlich ist, um 1 µg DNA in 10 min bei 37°C vollständig abzubauen, und entspricht 0,04 Kunitz-Einheiten.

Zusatzprodukte
Als Alternative zu Rinder-DNase I dient rekombinante DNase I (Kat.- Nr. AM2235). Eine aktivere, salztolerante DNase finden Sie in den TURBO™ DNase Produkten (Kat.- Nr. AM2239 und AM2238).