Kit de transcripción mMESSAGE mMACHINE™ T7 ULTRA

El kit mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra combina un nuevo análogo de la caperuza, el análogo de la caperuza anti inversión (ARCA), con una tecnología patentada de transcripción de alta producción para generar transcripciones de ARN que permiten una mayor producción de proteínas durante la traslación en comparación con otras transcripciones. El kit incluye reactivos suficientes para 50 reacciones. Ventajas del kit mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra:

• Sintetizar más proteína a partir ARN transcrito in vitro
• Expresar los transcritos de ARN in vitro e in vivo de forma más eficaz
• Estabilizar los transcritos in vivo con reactivos incluidos para la cola poli(A)

El ARN con caperuza ARCA es más activo a nivel translacional
Una modificación básica de ARCA resulta en su incorporación solo en la orientación funcional de traslación. El análogo de la caperuza tradicional se puede incorporar a las orientaciones funcionales y no funcionales. Como resultado, la incorporación de ARCA a las reacciones de transcripción produce un ARN con caperuza que permite una traslación del 100 %. Se mejora aún más con la inclusión de las colas poli(A) en las transcripciones de mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra. Los experimentos que comparan ARCA y las transcripciones de ARCA/cola poli(A) con el análogo de la caperuza y las transcripciones de análogo de la caperuza/cola poli(A) indican unos mayores niveles de síntesis de proteínas con el ARN con caperuza ARCA.

¿Qué es ARCA?
El análogo de la caperuza anti inversión (ARCA) es un análogo de caperuza modificado en el que el grupo 3' OH (más cercano a m⁷G) se sustituye por OCH₃ (ver esquema). Debido a esta sustitución, la ARN polimerasa solo puede iniciar la transcripción con el grupo hidroxilo restante, lo que fuerza la incorporación de ARCA en la orientación de avance. Como resultado, el 100 % de las transcripciones sintetizadas con ARCA en el extremo 5' se pueden traslacionar, lo que provoca un potente efecto estimulador en la traslación.

Colocación adecuada de caperuzas en el ARN transcrito in vitro
La colocación adecuada de caperuzas en el ARN corrige el inicio de la síntesis de proteínas, así como la estabilidad y el procesamiento del ARN mensajero (ARNm) in vivo. Las ribonucleasas (ARNasa) celulares degradan rápidamente el ARN tras la microinyección o transfección en las células. El ARN con caperuza se suele traslacionar de forma más eficaz en sistemas de traslación in vitro, lo que genera ARN con análogo de la caperuza incorporado solo en la orientación funcional. Por lo tanto, la sustitución del análogo de la caperuza tradicional por los resultados de ARCA en la síntesis de ARN con caperuza permite una traslación del 100 %.