Click-iT™ RNA Alexa Fluor™ 488 HCS Assay

El ensayo de HCS Click-iT® RNA Alexa Fluor® 488 permite la detección de la transcripción de ARN global de manera temporal y espacial en células (PNAS [2008] 105:15779-84). La capacidad de detectar ARN recién sintetizado o cambios en los niveles de ARN resultantes de enfermedades, daños ambientales o tratamientos farmacológicos es un aspecto importante del perfil toxicológico. Mediante el uso de un nucleósido modificado por alquinos, 5-etinilo uridina (EU) y potente química clic, el ARN recién sintetizado se puede detectar sin usar radioactividad ni anticuerpos con un simple procedimiento de dos pasos. En el primer paso, el nucleósido que contiene alquinos se alimenta a células o animales y se incorpora activamente al ARN naciente. El tamaño pequeño de la etiqueta permite la incorporación eficiente del nucleósido modificado en el ARN, pero no en el ADN. La detección utiliza la ligación quimioselectiva o reacción «clic» entre una azida y un alquino donde el ARN modificado se detecta con un colorante correspondiente que contiene azida. Con su «tamaño» diminuto, la molécula de detección Click-iT® puede penetrar fácilmente muestras complejas y deja abierta la posibilidad de análisis multiplex con otras sondas, incluidos los anticuerpos para la detección de proteínas interactivas con ARN para una mayor comprensión biológica.