Kit de proliferación celular Click-iT™ Plus EdU para adquisición de imágenes, colorante Alexa Fluor™ 594
Kit de proliferación celular Click-iT™ Plus EdU para adquisición de imágenes, colorante Alexa Fluor™ 594
Invitrogen™

Kit de proliferación celular Click-iT™ Plus EdU para adquisición de imágenes, colorante Alexa Fluor™ 594

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Los kits de imágenes de proliferación celular Click-iT Plus EdU Alexa Fluor se han optimizado para aplicaciones de microscopio fluorescenteMás información
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Número de catálogoCantidad
C106391 kit
Número de catálogo C10639
Precio (MXN)
19,241.28
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Cantidad:
1 kit
Precio (MXN)
19,241.28
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Los kits de imágenes de proliferación celular Click-iT Plus EdU Alexa Fluor se han optimizado para aplicaciones de microscopio fluorescente y son una excelente alternativa a los ensayos de proliferación tradicionales. En este ensayo, el análogo modificado de la timidina EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina, un análogo nucleósido de la timidina) se incorpora eficazmente al ADN recién sintetizado y se etiqueta fluorescentemente con una coloración brillante y fotoestable Alexa Fluor™ en una reacción de clic rápida, muy específica y suave.

Consulte más herramientas para la detección basada en imágenes de células proliferantes >

• Fácil: funciona a la primera cada vez y en menos tiempo que los métodos tradicionales
• Eficiente: sin pasos de desnaturalización ni tratamientos severos
• Resultados ricos en contenido: preservación mejorada de la morfología celular, la estructura del antígeno, la señal fluorescente GFP y la integridad del ADN
• Consistente: no depende de lotes de anticuerpos variables para la detección

El kit contiene todos los componentes necesarios para marcar y detectar la EdU incorporada, así como para realizar análisis del ciclo celular en muestras de células adherentes. Para el análisis del ciclo celular, el kit incluye un tinte fluorescente de color azul Hoechst 33342. El kit contiene reactivos suficientes para etiquetar 50 cubreobjetos 18 x 18 usando 500 µl de tampón de reacción por prueba.

Evite los tratamientos severos asociados al método BrdU
La medición de los cambios en la proliferación celular es un método fundamental para evaluar la salud celular, determinar la genotoxicidad y evaluar fármacos anticancerígenos. El método más preciso para llevar a cabo este procedimiento es mediante la medición directa de la síntesis de ADN. El método tradicional utiliza el análogo nucleósido BrdU (5-bromo-2'-desoxiuridina, un análogo nucleósido de la timidina), que se incorpora al ADN recién transcrito. Tras la incorporación, las muestras se tratan con métodos intensos (HCl, calor o enzimas) para desnaturalizar el ADN y exponer las moléculas BrdU a la detección por parte de los anticuerpos anti-BrdU. Sin embargo, el método BrdU para medir la proliferación celular requiere mucho tiempo y resulta difícil de ejecutar de manera uniforme. Los severos tratamientos necesarios para este método pueden afectar negativamente a la integridad de la muestra, a la morfología celular, a la calidad de la imagen y a la capacidad de multiplexar.

El ensayo Click-iT™ Plus EdU mide la tasa de la nueva síntesis de ADN basada en la incorporación de la EdU analógica nucleósido en el ADN. La detección se obtiene mediante una reacción catalizada «clic» que normalmente se completa en 30 minutos. La reacción clic utiliza mitades bioortogonales (biológicamente únicas) para marcar de manera fluorescente las células proliferantes, lo que produce fondos bajos y una sensibilidad de detección muy alta. Debido a las condiciones moderadas de reacción, el ensayo Click-iT™ Plus puede determinar con exactitud la proliferación celular al mismo tiempo que mantiene la morfología celular, la integridad del ADN, los lugares de unión de antígenos y la señal fluorescente de GFP. La conservación de la integridad del ADN permite la tinción del ADN, incluida la tinción con tintes utilizados para el análisis del ciclo celular.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de detecciónFluorescente
Tipo de coloranteAlexa Fluor™ 594
FormatoVial(es)
Características ecológicasMenos peligroso
Cantidad1 kit
Para utilizar con (aplicación)Viabilidad celular, Proliferación y función
Para utilizar con (equipo)Microscopio de fluorescencia
Línea de productosClick-iT
Tipo de productoKit de proliferación celular
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Contiene EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina), coloración picolil azida Alexa Fluor™, dimetilsulfóxido anhidro (DMSO), tampón de reacción Click-iT™ EdU, protector de cobre, tampón aditivo Click-iT™ EdU y Hoechst 33342.
  • Almacenar entre 2 °C y 8 °C
  • Desecar y proteger de la luz.

    Preguntas frecuentes

    What are the main characteristics of a Click-iT reaction?

    Click reactions have several general characteristics: the reaction is efficient, no extreme temperatures or solvents are required, the reaction is complete within 30 minutes, the components of the reaction are bio-inert, and perhaps most importantly, no side reactions occur-the label and detection tags react selectively and specifically with one another. This final point is a key advantage of this powerful detection technique; it is possible to apply click chemistry-labeled molecules to complex biological samples and detect them with unprecedented sensitivity due to the extremely low background of the reaction.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

    I will be performing a cell proliferation assay using Click-iT EdU kit. At what point can I stop overnight, or do I have to perform all the steps continuously?

    One may store the sample after fixation overnight in PBS at 4oC. For longer storage (<1 week) , store in buffer with 1-2% formaldehyde or in formalin to limit microbial growth. If you use sodium azide as a microbial inhibitor, it must be completely removed prior to the Click-iT reaction.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Viability, Proliferation, Cryopreservation, and Apoptosis Support Center.

    A control for a Click-iT EdU labeling experiment uses no EdU and the Click-iT reaction using Alexa Fluor 594 azide. The mouse heart tissue sections are showing non-specific labeling in red, seen in particular clusters of cells. They don't overlap with DAPI. What is the problem?

    The problem is likely not the Alexa Fluor 594 azide. Since there are no alkynes endogenous to mouse tissue, there is nothing for the dye-azide to bind to. Since the background doesn't overlap with nuclei (DAPI signal), this isn't an issue of unintended EdU labeling. This red is autofluorescence from red blood cells; they autofluoresce in the red and don't have nuclei. This can be confirmed by checking a completely unlabeled tissue section (no dye present at all) to see if they are still present and by examining the cells at high magnification and looking for corpuscular shape.

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    Can I combine Click-iT or Click-iT Plus reactions with phalloidin conjugates used for actin staining?

    We do not recommend using phalloidin conjugates for staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions since phalloidin is extremely sensitive to the presence of copper.

    For staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions, we recommend using anti-α-actin antibodies for staining actin in the cytoskeleton. You can find a list of our actin antibodies here.

    Another option would be to use the Click-iT Plus Alexa Fluor Picolyl Azide Toolkit (Cat. Nos. C10641, C10642, C10643). These Click-iT Plus toolkits provide Copper and Copper protectant separately which makes it easier to titrate the copper concentration to obtain optimal labeling with minimal copper-mediated damage. You may need to optimize the click reaction with the lowest possible concentration of copper and then perform the phalloidin staining.

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    How can I generate a positive control for the Click-iT Plus EdU imaging kits?

    Consider the normal replication rate for the cell of interest and culture the cells with multiple doses of EdU for one full cycle. For example, if cells divide every 24 hours, consider 3 or 4 additions of fresh EdU every 6 to 8 hrs and then fix and permeabilize within 2 to 3 hrs after the final addition. This helps to ensure a high level of EdU incorporation in the majority of the population that is replicating. This positive control provides proof that the click reaction and components are working properly.

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    Citations & References (12)

    Citations & References
    Abstract
    Silencing of STRN4 suppresses the malignant characteristics of cancer cells.
    Authors:Wong M, Hyodo T, Asano E, Funasaka K, Miyahara R, Hirooka Y, Goto H, Hamaguchi M, Senga T,
    Journal:
    PubMed ID:25250919
    The striatin family of proteins, comprising STRN, STRN3 and STRN4, are multidomain-containing proteins that associate with additional proteins to form a large protein complex. We previously reported that STRN4 directly associated with protein kinases, such as MINK1, TNIK and MAP4K4, which are associated with tumor suppression or tumor progression. However, ... More
    Primary cilia control hedgehog signaling during muscle differentiation and are deregulated in rhabdomyosarcoma.
    Authors:Fu W, Asp P, Canter B, Dynlacht BD,
    Journal:
    PubMed ID:24927541
    The primary cilium acts as a cellular antenna, transducing diverse signaling pathways, and recent evidence suggests that primary cilia are important in development and cancer. However, a role for cilia in normal muscle development and rhabdomyosarcoma (RMS) has not been explored. Here we implicate primary cilia in proliferation, hedgehog (Hh) ... More
    Heterogeneous Responses to Mechanical Force of Prostate Cancer Cells Inducing Different Metastasis Patterns.
    Authors:
    Journal:Adv Sci (Weinh)
    PubMed ID:32775149
    Transcriptome dynamics of hippocampal neurogenesis in macaques across the lifespan and aged humans.
    Authors:
    Journal:Cell Res
    PubMed ID:35750757
    The Primate-Specific Gene TMEM14B Marks Outer Radial Glia Cells and Promotes Cortical Expansion and Folding.
    Authors:
    Journal:Cell Stem Cell
    PubMed ID:29033352