CellEvent™ Senescence Green Detection Kit

Das CellEvent Grünes Seneszenznachweis-Kit besteht aus einer fluoreszierenden Sonde und einem optimierten Puffer, der die bildbasierte Ermittlung von seneszenten Zellen ermöglicht. Die Fluorescein-basierte Sonde enthält zwei Galactosidgruppen, wodurch sie ein Ziel für β-Galactosidase ist. Die Aktivierung der β-Galactosidase wird häufig als Biomarker für alternde Zellen verwendet. Dieses Hydrolase-Enzym befindet sich in Lysosomen und wandelt β-Galactoside unter sauren pH-Bedingungen zu Monosaccharide um. Das enzymatisch gespaltene Produkt bleibt aufgrund der kovalenten Bindung von intrazellulären Proteinen in der Zelle erhalten und sendet ein fluorogenes Signal mit Absorptions-/Emissionsmaxima von 490/514 nm aus.

Das CellEvent Grünes Seneszenznachweis-Kit hat folgende Merkmale:
• Zuverlässige und schnelle Fluoreszenzdetektion von seneszierenden Zellen
• Größere Empfindlichkeit als herkömmliche kolorimetrische x-gal
• Fluoreszenzsignal bleibt gut erhalten und wird mit den standardmäßigen Alexa Fluor 488/FITC-Filtersätzen erkannt
• Multiplex-fähig—Die fluoreszierende Seneszenzsonde ist Multiplex-fähig

Aufgrund einer begrenzten replikativen Lebensdauer treten normale Zellen in einen Zellzyklus-Stillstand ein, der auch als zelluläre Seneszenz bezeichnet wird. In dieser seneszierenden Phase bleiben die Zellen stoffwechselaktiv, ohne den Zelltod oder die Zellteilung zu durchlaufen. Sie nehmen ein spezifisches Phänotyp an, das das Aussehen mehrerer Kerne, die erhöhte Vakuolisierung, die Expression von pH-abhängiger β-Galactosidase und die morphologische Vergrößerung und Erweiterung umfasst. Seneszenz kann durch eine Vielzahl von Mechanismen eine Rolle bei der Tumorunterdrückung, dem Tumorwachstum, dem Altern und der Gewebereparatur spielen.

Die Aktivierung von β-Galactosidase wird häufig als Biomarker für seneszierende Zellen genutzt. Dieses Hydrolase-Enzym befindet sich in Lysosomen und wandelt β-Galactoside unter sauren pH-Bedingungen in Monosaccharide um. Die Aktivität ist bei lysosomalem pH -Wert 4 optimal, herkömmliche Assays messen jedoch bei pH 6. Es hat sich gezeigt, dass die normalisierte β-Galactosidase-Aktivität in seneszenten Zellen doppelt so hoch ist wie in noch nicht seneszenten Zellen, unabhängig vom pH-Wert, der während der Prüfung verwendet wird.

Ein kolorimetrisches Substrat für β-Galactosidase, 5-Bromo-4-chlor-3-indoxyl-β-D-galactopyranosid (x-Gal), wird in vitro seit langem zur Erkennung metabolischer Aktivität in Zellen verwendet. Die Verwendung ist jedoch aufgrund eines inkonsistenten Signals, der Länge des Assays und der Unfähigkeit, eine Multiplexverbindung herzustellen, beschränkt.

Deshalb haben wir ein empfindliches, fluoreszierendes Substrat für β-Galaktosidase entwickelt, das für den Nachweis alternder Zellen verwendet werden kann. Die CellEvent Grüne Seneszenzsonde ist ein fluorescein-basiertes Reagenz, das zwei Galactosidgesellschaften enthält und somit ein spezifisches Ziel von β-Galactosidase ist. Das enzymatisch gespaltene Produkt bleibt aufgrund der kovalenten Bindung von intrazellulären Proteinen in der Zelle erhalten und sendet ein fluorogenes Signal mit Absorptions-/Emissionsmaxima von 490/514 nm aus.

Das CellEvent Grüne Seneszenz-Kit beinhaltet eine CellEvent Grüne Seneszenzsonde und einen optimierten Puffer für den Nachweis von seneszierenden Zellen in festen Proben. Diese Sonde kann mit anderen fluoreszierenden Reagenzien, die mit Paraformaldehydfixierung kompatibel sind, per Multiplexing verwendet werden.