Agar bilis-triptona (deshidratado)

Detecte y cuente la Escherichia coli en alimentos utilizando un método directo de siembra en placa modificado con el agar bilis-triptona (deshidratado) Thermo Scientific™ Oxoid™. El método directo de siembra en placa (DPM) descrito por Anderson y Baird-Parker es una modificación del descrito por Delaney et al.¹. Este método, desarrollado para la detección y enumeración de Escherichia coli en muestras de agua y alimentos, utiliza la capacidad de la Escherichia coli para producir indol a partir de triptófano a 44 °C cuando se cultiva en una membrana de acetato de celulosa sobre placas de agar triptona-bilis.

El aislamiento y el recuento de Escherichia coli y las coliformes presentes en muestras de alimentos o medioambientales son indicadores relevantes de la higiene. El agar triptona-bilis se ha desarrollado de acuerdo con la formulación de Anderson y Baird-Parker² para la detección y el recuento de Escherichia coli en los alimentos.

Tiene varias ventajas sobre los métodos más antiguos:

• Es más rápido.
• Es menos variable.
• Ofrece una mejor recuperación de muestras congeladas.
• Detecta cepas anaerogénicas y pobres en la fermentación de la lactosa.

El método directo de siembra en placa (DPM) descrito por Anderson y Baird-Parker es una modificación del descrito por Delaney et al.². Este método, desarrollado para la detección y enumeración de Escherichia coli en muestras de agua y alimentos, utiliza la capacidad de la Escherichia coli para producir indol a partir de triptófano a 44 °C cuando se cultiva en una membrana de acetato de celulosa sobre placas de agar triptona-bilis.

Los autores concluyeron que la formación de indol era una característica más fiable para las cepas de Escherichia coli tanto enterotoxigénicas como para las no enterotoxigénicas que para la fermentación de la lactosa. Ewing³ descubrió que solo el 90 % de las cepas de Escherichia producen ácido a partir de la lactosa en dos días, mientras que el 99 % de las cepas producen indol.

La Comisión Internacional de Especificaciones microbiológicas para los Alimentos (CMSF) ⁴ comparó el número más probable (MPN) y el método directo de siembra en placa (DPM) Anderson-Baird-Parker y concluyó que el DPM era preferible al método de recuento de la MPN de Escherichia coli en carnes crudas, debido a una menor variabilidad, mejor recuperación de las muestras congeladas, mayor rapidez y menor cantidad de medio necesario.

El método directo de siembra en placa contará tanto las cepas de Escherichia coli anaerogénicas como las cepas que provocan una fermentación tardía de la lactosa, que se perderían por el método MPN. Según Ewing³, estos organismos comprenden hasta el 10 % de las cepas de Escherichia.

Holbrook et al.⁵ han modificado además el método directo de siembra en placa para la detección y recuento de células de Escherichia coli dañadas subletalmente en alimentos congelados, secos, procesados por calor o ácidos. En esta modificación el inóculo se aplica a una membrana de acetato de celulosa en agar glutamato modificado con minerales y se incuba durante 4 horas a 37 °C. El paso de reanimación permite la reparación de células estresadas antes de la transferencia de la membrana a una placa de agar triptona-bilis.

Se ha demostrado que la presencia de altos niveles de carbohidratos fermentables inhibirá la síntesis de la triptofanasa⁶ y por lo tanto detendrá la formación de indol. Holbrook et al. han demostrado que el paso de reanimación reduce la alta concentración de azúcar presente en el inóculo a un nivel que no interfiere con la producción de indol de la Escherichia coli cuando se cultiva en el agar triptona-bilis. La fase de reanimación debe realizarse siempre al analizar productos lácteos u otros productos que contengan altas concentraciones de azúcares.

Se encontró que el reactivo de indol descrito por Vracko y Sherris⁷ era el más adecuado, ya que ofrece la reacción y reproducibilidad más distintivas. El reactivo, p-dimetilaminobenzaldehído al 5 % en ácido clorhídrico 1N es fácil de preparar y no se deteriora cuando se mantiene durante tres meses en lugar oscuro y a temperatura ambiente.

Todas las cepas indol positivas generan colonias de color rosa bien definidas cuando se «tiñen» utilizando el reactivo indol; las colonias que no producen indol son de color paja.

El crecimiento de organismos indol positivos distintos de la Escherichia coli se inhibe por la acción selectiva de las sales biliares y la elevada temperatura de incubación.

Las membranas «teñidas» pueden «fijarse» secándolas a la luz solar directa o bajo una lámpara fluorescente ultravioleta de baja presión con un filtro de tipo «Woods». Cuando se secan, se mejora la intensidad de la reacción de tinción y dichas membranas pueden almacenarse como referencia.

No todos los productos están disponibles para la venta en todas las regiones. Consulte disponibilidad.

Los productos Remel™ y Oxoid™ ahora forman parte de la marca Thermo Scientific.