DAF-FM Diacetate (4-Amino-5-Methylamino-2',7'-Difluorofluorescein Diacetate)

DAF-FM ist ein Reagenz, das für Nachweis und Quantifizierung von niedrigen Konzentrationen an Stickstoffmonoxid (NO) verwendet wird. Es ist im Wesentlichen nicht fluoreszierend, bis es mit NO zu einem fluoreszierenden Benzotriazol reagiert. Die Fluoreszenz von DAF-FM kann mit jedem Instrument nachgewiesen werden, das für die Erkennung von Fluorescein geeignet ist, z. B. Durchflusszytometer, Mikroskope, Mikrotiterplatten-Lesegeräte und Fluorometer.

DAF-FM-Spezifikationen:
• Ex/Em von DAF-FM: ∼495/515 nm
• Das gefriergetrocknete Produkt sollte mit DMSO aufgelöst und dann auf einen wässrigen Puffer zur Herstellung einer funktionsfähigen Lösung gegeben werden
• DAF-FM-Diazetat ist membrangängig und diffundiert passiv durch Zellmembranen; sobald es sich einmal in der Zelle befindet, wird es in eine nicht membrangängige Form umgewandelt
• Puffer mit Rinderserumalbumin (BSA) und Phenolrot wirken sich möglicherweise auf die Fluoreszenz aus und sollten mit Vorsicht verwendet werden
• Die Fluoreszenzquantenausbeute von DAF-FM beträgt ∼0,005, erhöht sich aber nach Reaktion mit NO etwa auf das 160-fache (∼0,81)

Anwendungen von DAF-FM:
• Bewertung der NO-Produktion in Lymphoblasten mit Transaldolase-Mangel mittels Durchflusszytometrie
• Nachweis der NO-Akkumulation in embryonalen kortikalen Neuronen nach Neurotrophinstimulation
• In-vivo-Bildgebung von NO beim Zebrabärbling
• Intravitaler mikroskopischer Nachweis der NO-Erzeugung im Zusammenhang mit der Angiogenese bei Mäusen
• Quantifizierung von ATP-induzierter NO-Freisetzung in Kaninchenthrombozyten

Hauptvorteile von DAF-FM im Vergleich zu DAF-2
Die Bandbreite des NO-Adduktes von DAF-FM ist oberhalb eines pH-Wertes von 5,5 unabhängig vom pH-Wert. Außerdem ist das NO-Addukt von DAF-FM deutlich photostabiler als das von DAF-2, dies bedeutet zusätzliche Zeit für die Bilderfassung. Schließlich reagiert DAF-FM empfindlicher auf NO als DAF-2 (NO-Nachweisgrenze bei DAF-FM: ∼3 nM, im Vergleich dazu bei DAF-2: ∼5 nM).

Sonden für die Stickstoffmonoxid-Forschung
Wir bieten verschiedene Produkte für den Nachweis von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) und Stickstoffmonoxid (NO). Erfahren Sie mehr über diese Produkte unter Sonden für die Untersuchung von Stickstoffmonoxid – Abschnitt 18.3 im Molecular Probes™ Handbuch.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für therapeutische oder diagnostische Zwecke bei Menschen oder Tieren vorgesehen.