Klenow Fragment, exo– (5 U/μL)

Name: Klenow Fragment, exo– (5 U/μL)
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Das Thermo Scientific Klenow Fragment, exo- ist das größere Fragment der beiden Proteinfragmente der DNA-Polymerase I Es weist eine 5‘3‘-Polymeraseaktivität auf, aber es fehlen 3‘5‘- und 5‘3‘-Exonukleaseaktivitäten der DNA-Polymerase I. Die 3‘5‘-Exonukleaseaktivität des Enzyms wird durch Mutationen an der 3‘5‘-Exonuklease-Wirkstelle eliminiert.Highlights keine 3‘5‘-Exonukleaseaktivität Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide) aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-PuffernAnwendungen Random-primed DNA-Markierung Markierung durch Fill-in 5‘-Überhänge der dsDNA Strangverdrängungsamplifikation (SDA) DNA-Sequenzierung durch die Sanger-MethodeHinweisKlenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3‘→3‘-Polymeraseaktivität auf, aber es fehlen 3‘5‘- und 5‘3‘-Exonukleaseaktivitäten der DNA-Polymerase I. Die 3‘5‘-Exonukleaseaktivität des Enzyms wird durch Mutationen an der 3‘5‘-Exonuklease-Wirkstelle eliminiert.Highlights keine 3‘5‘-Exonukleaseaktivität Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide) aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-PuffernAnwendungen Random-primed DNA-Markierung Markierung durch Fill-in 5‘-Überhänge der dsDNA Strangverdrängungsamplifikation (SDA) DNA-Sequenzierung durch die Sanger-MethodeHinweisKlenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3‘→5‘- und 5‘3‘-Exonukleaseaktivitäten der DNA-Polymerase I. Die 3‘5‘-Exonukleaseaktivität des Enzyms wird durch Mutationen an der 3‘5‘-Exonuklease-Wirkstelle eliminiert.Highlights keine 3‘5‘-Exonukleaseaktivität Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide) aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-PuffernAnwendungen Random-primed DNA-Markierung Markierung durch Fill-in 5‘-Überhänge der dsDNA Strangverdrängungsamplifikation (SDA) DNA-Sequenzierung durch die Sanger-MethodeHinweisKlenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3‘→3‘-Exonukleaseaktivitäten der DNA-Polymerase I. Die 3‘5‘-Exonukleaseaktivität des Enzyms wird durch Mutationen an der 3‘5‘-Exonuklease-Wirkstelle eliminiert.Highlights keine 3‘5‘-Exonukleaseaktivität Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide) aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-PuffernAnwendungen Random-primed DNA-Markierung Markierung durch Fill-in 5‘-Überhänge der dsDNA Strangverdrängungsamplifikation (SDA) DNA-Sequenzierung durch die Sanger-MethodeHinweisKlenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3‘→5‘-Exonukleaseaktivität des Enzyms wird durch Mutationen an der 3‘5‘-Exonuklease-Wirkstelle eliminiert.Highlights keine 3‘5‘-Exonukleaseaktivität Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide) aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-PuffernAnwendungen Random-primed DNA-Markierung Markierung durch Fill-in 5‘-Überhänge der dsDNA Strangverdrängungsamplifikation (SDA) DNA-Sequenzierung durch die Sanger-MethodeHinweisKlenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3‘→5‘-Exonuklease-Wirkstelle eliminiert.Highlights keine 3‘5‘-Exonukleaseaktivität Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide) aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-PuffernAnwendungen Random-primed DNA-Markierung Markierung durch Fill-in 5‘-Überhänge der dsDNA Strangverdrängungsamplifikation (SDA) DNA-Sequenzierung durch die Sanger-MethodeHinweisKlenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3‘

Highlights

• keine 3‘5‘-Exonukleaseaktivität Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide) aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-PuffernAnwendungen Random-primed DNA-Markierung Markierung durch Fill-in 5‘-Überhänge der dsDNA Strangverdrängungsamplifikation (SDA) DNA-Sequenzierung durch die Sanger-MethodeHinweisKlenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3‘→5‘-Exonukleaseaktivität Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide) aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-PuffernAnwendungen Random-primed DNA-Markierung Markierung durch Fill-in 5‘-Überhänge der dsDNA Strangverdrängungsamplifikation (SDA) DNA-Sequenzierung durch die Sanger-MethodeHinweisKlenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3‘
• Einbindung modifizierter Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Fluorescein-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Biotin-markierte Nukleotide)
• aktiv in Restriktionsenzym-, PCR- und RT-Puffern

Anwendungen
• Random-primed DNA-Markierung
• Markierung durch Fill-in 5'-Überhänge der dsDNA
• Strangverdrängungsamplifikation (SDA)
• DNA-Sequenzierung durch die Sanger-Methode

Hinweis

Klenow-Fragment, Exo- wird nicht für DNA-Bluntreaktionen vor der DNA-Ligation empfohlen, da es häufig ein oder mehrere zusätzliche Nukleotide zu den 3'-Enden von stumpfen DNA-Substraten hinzufügt, ohne dabei der Matrize zu folgen.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications

Kompatibler PufferRestriktionsenzym, PCR, RT-Puffer

PolymeraseDNA Polymerase I

ProdukttypKlenow-Fragment

Menge300 E

Konzentration5 U/μl

Unit SizeEach

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

What are the differences between Thermo Scientific DNA Polymerase I, Klenow Fragment, and Klenow Fragment (exo-)?

Thermo Scientific DNA Polymerase I possesses 5′?3′ DNA synthesis activity, 3′?5′ exonuclease (proofreading) activity, and 5′?3′ exonuclease activity. Klenow Fragment is the large fragment of DNA polymerase I. It exhibits 5′?3′ polymerase activity and 3′?5′ exonuclease (proofreading) activity, but lacks 5′?3′ exonuclease activity. Klenow Fragment, exo-, is also the large fragment of DNA polymerase I. It exhibits 5′?3′ polymerase activity, but lacks the 3′?5′ and 5′?3′ exonuclease activities.

What conditions are optimal for fill-in reactions using Klenow (Large fragment of DNA Polymerase)?

Klenow can be used to "fill in" 5' overhangs of double-stranded DNA fragments using common restriction endonuclease buffers. We recommend REact 2 buffer (1X concentration is 50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2) , but other buffers will also work.

Fill-in Reaction Conditions:

1. Dilute Large Fragment of DNA Polymerase I to 0.5 U/µL with Klenow Dilution Buffer.
2. To a 1.5-mL microcentrifuge tube on ice, add: 10X REact 2 Buffer - 3 µL, 0.5 mM dATP - 1 µL, 0.5 mM dCTP - 1 µL, 0.5 mM dGTP - 1 µL, 0.5 mM dTTP - 1 µL, DNA 0.5-1 µg, Large fragment of DNA Polymerase I - 1 µL, Autoclaved distilled water to 30 µL.
3. Mix gently and centrifuge briefly to bring the contents to the bottom of the tube.
4. Incubate at room temperature for 10-15 minutes or 20 minutes on ice.
5. Terminate fill-in reaction by phenol extraction.

To label the DNA fragment, use 1-2 µL of [alpha-³²P]dNTP (400 Ci/mmol, 10 mCi/mL) (24-48 pmoles) instead of the corresponding cold dNTP.

Note: Thermo Fisher Scientific also offers an Exo minus Klenow, which is provided with its own buffers.