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RevertAid H Minus Reverse Transcriptase (200 U/μl)

Name: RevertAid H Minus Reverse Transcriptase (200 U/μl)
SKU: EP0452
Price: 812.00 EUR

Thermo Scientific RevertAid H Minus reverse Transkriptase ist eine rekombinante M-MuLV RT. Das Enzym besitzt eine RNA-abhängige und DNA-abhängige Polymerase-Aktivität,Weitere Informationen

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Katalognummer	Menge
EP0452	5 x 10.000 Einheiten
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Katalognummer EP0452

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812,00

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Thermo Scientific RevertAid H Minus reverse Transkriptase ist eine rekombinante M-MuLV RT. Das Enzym besitzt eine RNA-abhängige und DNA-abhängige Polymerase-Aktivität, aufgrund einer Punktmutation in der RNase H-Domäne jedoch keine RNase H-Aktivität. RevertAid H Minus reverse Transkriptase degradiert RNA in RNA-DNA-Hybriden während der Synthese der Erststrang-cDNA nicht, weshalb hohe Ausbeuten von cDNA in voller Länge aus langen Templates erzielt werden. RevertAid H Minus reverse Transkriptase hält die Aktivität über einen weiten Temperaturbereich (42 bis 50 °C) aufrecht.

Besonderheiten

• Hohe Ausbeuten von Erststrang-cDNA bis zu 13 kb
• Optimale Aktivität bei 42 bis 45 °C
• Aktiv bis 55 °C
• Integriert modifizierte Nukleotide (z. B. Cy3-, Cy5-, Rhodamin-, Aminoallyl-, Fluorescein-markierte Nukleotide)

Anwendungen

• Synthese von Erstrang cDNA für RT-PCR und Echtzeit-RT-PCR
• Reverse Transkription bei höheren Temperaturen zur Reduzierung der Auswirkungen der Sekundärstruktur
• Synthese von cDNA für Klonierung und Expression
• Erzeugung markierter cDNA-Sonden für Microarrays
• DNA-Markierung
• Analyse von RNA durch Primer-Erweiterung

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Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications

EndprodukttypErststrang-cDNA

FormatStand-alone Enzyme

Optimale Reaktionstemperatur42 °C bis 45 °C

Menge5 x 10.000 Einheiten

ReaktionsformatSeparate Komponenten

ReagenztypReverse Transkription

Reverse TranskriptaseRevertAid H Minus

Ribonuklease-H-AktivitätKeine

VersandbedingungTrockeneis

Größe (Endprodukt)Bis 13 kb

AusgangsmaterialRNA

VerfahrenReverse Transkription

Konzentration200 U/μl

Reaktionsgeschwindigkeit60 min

Unit SizeEach

Inhalt und Lagerung

RevertAid H Minus Reverse Transkriptase (200 U/μl) wird mit 5X Reaktionspuffer (250 mM Tris-HCl (pH 8,3 bei 25°C), 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT) geliefert.
Lagerung bei -20°C.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H-minus RT or Maxima H-minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H-minus RTs for template-independent addition of C nucleotides.

Do Thermo Scientific reverse transcriptases (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT, and Maxima H-minus RT) possess terminal deoxynucleotidyl (TdT) activity?

All Thermo Scientific reverse transcriptases possess intrinsic TdT activity although at varying degrees depending upon the reaction conditions. For addition of template-independent C nucleotides (as for SMART and RACE experiments), this specific TdT activity can be induced by Mn2+. We would recommend Maxima H- or RevertAid H- minus RTs for this purpose.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H Minus RT or Maxima H Minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H Minus RTs for template-independent addition of C nucleotides. In contrast, reverse transcriptases with intrinsic RNase H activity are often favored in 1-step RT-qPCR applications.

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