MuA Transposase

Die Thermo Scientific Transposon Produkte basieren auf dem Transpositionsmechanismus des Bakteriophages Mu. Während der lytischen Phase des Phagenlebenszyklus repliziert die Maschine ihr Genom, indem sie wiederholt in das Wirtsgenom transponiert. Die Mu-Transpositionsreaktion wurde in eine In-vitro-Reaktion umgewandelt, die durch ein einziges Enzym katalysiert wurde – MuA-Transposase. In diesem System ist eine einzige In-vitro-Reaktion in der Lage, mehr als eine Million Transposon-Insertionsklone zu erzeugen.

Das Mutation Generation System (MGS-Kit) und das Stop Generation System (STOP-Kit) sind für die Funktionsanalyse von Proteinen vorgesehen. Mit diesen neuen Transposon-Hilfsmitteln können gesättigte Bibliotheken von mutierten Proteinen in einer einzigen Reaktion mit kürzerer Arbeitszeit als bei jeder anderen Methode erstellt werden. Die Position der Transposon-Insertion in jedem mutierten Klon kann entweder durch PCR oder Sequenzierung abgebildet werden. Mit MGS- und STOP-Kits sind Tausende mutierter Klone in nur 2 bis 3 Tagen für Expressionsstudien bereit.

Das MGS-Kit enthält den kompletten Satz an Reagenzien für die Transposon-basierte Linker-Scan-Mutagenese eines Zielproteins. Die MGS-Entranceposone dienen zur Vornahme subtiler Änderungen an der Struktur eines Zielproteins durch Einfügen von 15 bp In-Frame-Linkern in das entsprechende Zielgen. Diese In-Frame-Insertion ermöglicht die Konservierung nachgelagerter Sequenzen.

Die Entranceposone des STOP-Kits enthalten translationale Stopp-Codone in allen drei Leseframes innerhalb des terminalen Teils der Transposon-Sequenz. Die firmeneigene Modifikation des Stop Generation Systems ermöglicht es, aus praktisch jedem Zielprotein eine gesättigte C-Terminal-Deletionsbibliothek mit der Hinzufügung von maximal drei Aminosäuren zu erzeugen.

Merkmale:

• Effizient – erstellen Sie gesättigte Insertionsbibliotheken für die Sequenzierung und Proteinanalyse in einer einzigen Reaktion
• Schnell – verringern Sie die Arbeitszeit im Vergleich zu herkömmlichen Methoden
• Zufällig – eliminieren Sie die Präferenz für den Zielstandort oder Insertions-Hotspot

Anwendungen

Das STOP-Kit erzeugt abgeschnittene Proteine für Funktionsassays von:

• Enzymen
• Rezeptoren
• Strukturproteinen usw.

Das MGS-Kit erzeugt zufällige, 15 Basenpaar große In-vitro-Insertionen in jede Ziel-DNA für:

• Schnelle Erzeugung von fünf Aminosäure-Insertionsbibliotheken in Rahmen von Proteinen für Funktionsanalysen
• Schnelle und zufällige Mutagenese klonierter Promoter und anderer regulatorischer DNA-Regionen
• Zufällige Insertion einer Notl-Restriktionsschnittstelle in einen beliebigen Ziel-DNA-Klon

Vorteile
MGS-Kit

• Tausende verschiedener Insertionsklone aus einer Einzelreaktion
• Erzeugt zufällige Insertionen von 5 Aminosäuren in allen 3 Leserastern
• Kurze In-Frame-Insertionen, keine Stopp-Codons
• Flexibilität beim Mapping von Mutanten von Interesse: Mutationen lassen sich einfach durch Notl oder PCR kartieren
• Schnellerer und effektiver als Linker-Scan-Mutagenese
• STOP-Kit

• Umfangreiche Bibliothek von trunkierten Proteinen aus einer einzigen Reaktion in nur zwei Tagen
• Translations-STOPP-Codon in allen drei Leserastern
• Ziel-DNA-Sequenz kann unbekannt sein
• Schnellerer und effektiver als konventionelle Methoden
• Keine spezifischen Primer erforderlich

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