Kit de expresión de Pichia EasySelect™

El kit de expresión EasySelect™ Pichia proporciona todos los componentes necesarios para la producción de proteínas en la levadura Pichia pastoris. El kit EasySelect™ contiene cepas de levadura Pichia, vectores de expresión y reactivos que permiten la transformación de células de Pichia. La selección con el antibiótico Zeocin™ hace que sea fácil detectar variantes transformadas con un número alto de copias.

Ventajas del sistema de expresión de Pichia pastoris:
• Cultive células de Pichia con tanta facilidad como E. coli
• Obtenga una mayor densidad celular que con otros sistemas de expresión microbiana.
• Genere más proteína por célula que con otros sistemas de expresión microbiana.
• Benefíciese del procesamiento de proteínas eucariotas, el plegado de proteínas y las modificaciones postraslacionales.
• Ampliación sencilla de matraces de agitación a fermentación a escala industrial.

Un sistema probado de expresión de proteínas
Durante los últimos 30 años, Pichia pastoris se ha utilizado por laboratorios e industria de todo el mundo para producir cientos de proteínas diferentes de muchas especies, incluyendo la humana (ref. 1, 2, 3). La Pichia pastoris se puede cultivar tan fácilmente como las bacterias (E. coli) o la levadura (Saccharomyces cerevisiae) y, sin embargo, ofrece muchas ventajas sobre esos sistemas (ref. 4). La Pichia pastoris puede crecer a densidades celulares mucho más altas que las bacterias u otras levaduras. La Pichia pastoris es capaz de crecer con metanol como única fuente de carbono, lo que hace que su ampliación a niveles industriales sea relativamente barata.

El poder del promotor AOX1
El kit de expresión de Pichia EasySelect™ utiliza el promotor del gen de oxidasa de alcohol 1 (AOX1) de Pichia para impulsar la producción de la proteína. La Pichia pastoris es capaz de crecer con metanol como su única fuente de carbono. Cuando se cultiva en metanol como única fuente de carbono, el ARNm de AOX1 representa hasta un 5 % del ARNm total y la enzima de AOX1 puede suponer hasta el 30 % del peso celular (ref. 5).

El sistema de expresión de Pichia EasySelect™ se suministra con los vectores pPICZ y pPICZα. Los vectores pPICZ y pPICZα contienen un sitio de clonación múltiple (MCS) y permiten la inserción de su gen de interés bajo el control del promotor AOX1. Los vectores pPICZ y pPICZα también contienen una etiqueta c-Myc para una fácil detección y una etiqueta de polihistidina (6xHis) para detectar y purificar proteínas de manera sencilla.

Puesto la Pichia pastoris secreta naturalmente pocas proteínas, puede utilizar la secuencia de señalización extracelular en los vectores pPICZα para forzar la secreción de su proteína en el medio de cultivo para simplificar la purificación de flujo descendente.

Obtenga una integración de número de copia alto con el antibiótico Zeocin™
El kit de expresión de Pichia EasySelect™ utiliza el antibiótico Zeocin™ para seleccionar las células de Pichia transformadas. Los vectores pPICZ y pPICZα contienen el gen de la bleomicina de Streptoalloteichus hindustanus (Sh ble) que confiere resistencia al antibiótico Zeocin™. Los vectores pPICZ y pPICZα se pueden integrar de forma estable en el genoma de Pichia. Al aumentar la concentración del antibiótico Zeocin™, se pueden seleccionar fácilmente los clones con el mayor número de integrantes y los niveles de expresión de proteínas más altos.

El kit de expresión de Pichia EasySelect™ contiene los siguientes componentes:
• Viales de punción de cepas de Pichia pastoris y E. coli para iniciar sus cultivos.
• Soluciones para la fabricación de células de Pichia competentes para la transformación.
• Vectores pPICZ y pPICZα para la fusión de su gen con el promotor AOX1.
• Cebadores de secuenciación para confirmar la inserción de su gen en los vectores pPICZ.
• Antibiótico Zeocin™ para la selección de células de Pichia transformadas.

Solo para uso en investigación. No indicado para uso en procedimientos diagnósticos.

Enlaces relacionados
• Consulte el prospecto del producto para los vectores pPICZ A, B, C (PDF).
• Consulte el prospecto del producto para los vectores pPICZα A, B, C (PDF).
• Consulte el prospecto del producto para el antibiótico Zeocin™ (PDF).
• Obtenga más información sobre el uso de la Pichia pastoris en Pichia Protocols, 1.ª edición disponible en Invitrogen.
• Obtenga más información sobre otros sistemas de expresión de Pichia de Invitrogen.

Referencias

1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002 Aug; 13 (4): 329-32. [PubMed]
3. Cregg JM. Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems. Methods Mol Biol. 2007;389:1-10. [PubMed]
4. Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris. Methods Enzymol. 2009;463:169-89. [PubMed]
5. Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA. Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris. Mol Cell Biol. Marzo de 1989;9(3):1316-23. [PubMed]