EasySelect™ Pichia Expressionskit

Das EasySelect™ Pichia-Expressionskit enthält alle erforderlichen Komponenten für die Proteinproduktion in der Hefe Pichia pastoris. Das EasySelect™ Kit enthält Pichia-Hefestämme, Expressionsvektoren und Reagenzien, die die Transformation von Pichia-Zellen ermöglichen. Die Auswahl mit Zeocin-Antibiotikum™ macht es einfach, nach Varianten mit hoher Kopienzahl zu screenen.

Vorteile des Pichia pastoris-Expressionssystems:
• Kultievieren Sie Pichia-Zellen so leicht wie E. coli
• Erhalten Sie eine höhere Zelldichte als andere mikrobielle Expressionssysteme.
• Erzeugen Sie mehr Protein pro Zelle als andere mikrobielle Expressionssysteme.
• Profitieren Sie von eukaryotischer Proteinverarbeitung, Proteinfaltung und post-translationalen Modifikationen.
• Einfaches Aufskalieren von Schüttelkolben bis hin zur industriellen Fermentation.

Ein bewährtes Proteinexpressionssystem
In den letzten 30 Jahren wurde Pichia pastoris von Laboren und der Industrie weltweit für die Produktion von Hunderten verschiedener Proteine aus vielen Spezies, einschließlich Menschen, verwendet (Ref 1, 2, 3). Pichia pastoris kann so leicht wie Bakterien (E. coli) oder Hefe (Saccharomyces cerevisiae) kultiviert werden, bietet jedoch gegenüber diesen Systemen viele Vorteile (Ref. 4). Pichia pastoris kann zu viel höheren Zelldichten wachsen als Bakterien oder andere Hefen. Pichia pastoris ist in der Lage, auf Methanol als alleinige Kohlenstoffquelle zu wachsen, wodurch eine Skalierung auf Industrieniveau relativ kostengünstig ist.

Die Power des AOX1 Promoters
Das EasySelect™ Pichia-Expressionskit nutzt den Promotor aus dem Pichia Alkoholoxidase 1 (AOX1) Gen, um die Produktion Ihres Proteins zu fördern. Pichia pastoris ist in der Lage, auf Methanol als einzige Kohlenstoffquelle zu wachsen. Wenn AOX1 mRNA auf Methanol als alleinige Kohlenstoffquelle angebaut wird, entspricht sie bis zu 5 % der Gesamt-mRNA, und AOX1-Enzym kann bis zu 30 % des Zellgewichts (Ref. 5) betragen.

Das EasySelect™ Pichia-Expressionssystem wird mit den Vektoren pPICZ und pPICZα geliefert. Die pPICZ- und pPICZα-Vektoren enthalten eine Mehrfachklonierungsstelle (MCS) und ermöglichen das Einfügen Ihres Gens von Interesse unter Kontrolle des AOX1-Promoters. Die pPICZ- und pPICZα-Vektoren enthalten außerdem einen c-Myc-Tag zur einfachen Erkennung und einen Polyhitidin (6XHis)-Tag zur einfachen Erkennung und Aufreinigung Ihres Proteins.

Da Pichia pastoris natürlich nur wenige Proteine sezerniert, können Sie die extrazelluläre Signalsequenz in den pPICZα-Vektoren verwenden, um die Sekretion Ihres Proteins in das Kulturmedium zu erzwingen, um die Aufreinigung im unteren Bereich zu vereinfachen.

Holen Sie sich High-Copy Number-Integration mit Zeocin™ Antibiotikum
Das EasySelect™ Pichia Expressionskit verwendet das Zeocin-Antibiotikum™ zur Auswahl transformierter Pichia-Zellen. PPICZ- und pPICZα-Vektoren enthalten das Bleomycin-Gen aus Streptoalloteichus hindustanus (Sh ble), das Resistenz gegen Zeocin-Antibiotikum™ verleiht. Die pPICZ- und pPICZα-Vektoren können stabil in das Pichia-Genom integriert werden. Durch die Erhöhung der Konzentration von Zeocin-Antibiotika™ können Sie ganz einfach für Klone mit der höchsten Anzahl von Integranten und höchsten Proteinexpressionswerten auswählen.

Das EasySelect™ Pichia-Expressionskit enthält die folgenden Komponenten:
• Stechen Sie Fläschchen Pichia pastoris- und E. coli-Stämme, um Ihre Kulturen zu starten.
• Lösungen zur Herstellung transformationsfähiger Pichia-Zellen.
• PPICZ- und pPICZα-Vektoren zur Verschmelzung Ihres Gens mit dem AOX1-Promotor.
• Sequenzierungsprimere zur Bestätigung der Einfügung Ihres Gens in die pPICZ-Vektoren.
• Zeocin™-Antibiotikum zur Auswahl transformierter Pichia-Zellen.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für die Verwendung in Diagnoseverfahren vorgesehen.

Verwandte Links
• Sehen Sie sich die Produkteinlage für die pPICZ A, B, C Vektoren an (PDF).
• Sehen Sie sich die Produkteinlage für die pPICZα A, B, C Vektoren an (PDF).
• Produkteinlage für Zeocin™ Antibiotika (PDF).
• Erfahren Sie mehr über die Verwendung von Pichia pastoris in Pichia Protocols 1. Ausgabe erhältlich von Invitrogen.
• Erfahren Sie mehr über andere Pichia-Expressionssysteme von Invitrogen.

Referenzen

1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002 Aug;13(4):329-32. [PubMed]
3. Cregg JM. Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems. Methods Mol Biol. 2007;389:1-10. [PubMed]
4. Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris. Methods Enzymol. 2009;463:169-89. [PubMed]
5. Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA. Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris. Mol Cell Biol. 1989 Mar;9(3):1316-23. [PubMed]