TA Cloning™ Kit, with pCR™2.1 Vector, without competent cells
TA Cloning™ Kit, with pCR™2.1 Vector, without competent cells
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TA Cloning™ Kit, with pCR™2.1 Vector, without competent cells

Das TA Cloning™ Kit mit pCR™2.1 Vektor ermöglicht eine schnelle und einfache Klonierungsstrategie für direktes Einfügen eines Taq-amplifizierten PCR-Produkts inWeitere Informationen
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KatalognummerAnzahl Reaktionen
K20204040 Reaktionen
K20202020 Reaktionen
Katalognummer K202040
Preis (EUR)
574,65
Exklusiv online
602,00
Ersparnis 27,35 (5%)
Each
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Anzahl Reaktionen:
40 Reaktionen
Preis (EUR)
574,65
Exklusiv online
602,00
Ersparnis 27,35 (5%)
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Das TA Cloning™ Kit mit pCR™2.1 Vektor ermöglicht eine schnelle und einfache Klonierungsstrategie für direktes Einfügen eines Taq-amplifizierten PCR-Produkts in einen Plasmid-Vektor. Das TA Cloning™ Kit verwendet den pCR™2.1 Klonierungsvektor und ExpressLink™ T4 DNA Ligase, um ein Ligationsprodukt in einem Ligationsschritt von fünfzehn Minuten bei Raumtemperatur zu erzeugen. Reaktionen erbringen in der Regel über 80 % Rekombinationen mit Inserts.

Merkmale des TA Cloning™ Kit mit pCR™2.1 Vektor:
• Schnell und praktisch – Ligation bei Raumtemperatur in 15 Minuten
• Effizient – Blau/Weiß-Screening und über 80 % Klone mit korrektem Insert
• Flexibel – Wahl von Kanamycin- oder Ampicillin-Resistenz für eine flexible Antibiotika-Auswahl
• Sorgenfrei – Eliminiert jegliche enzymatischen Modifikationen des PCR-Produkts
• Optimiert – Erfordert keine Verwendung von PCR-Primern, die Restriktionsstellen enthalten

Der pCR™2.1 Vektor bietet:
• 3'-T-Überhänge für die direkte Ligation von Taq-amplifizierten PCR-Produkten
• T7 Promoter zur In-vitro-RNA-Transkription und -Sequenzierung
• Ein vielseitiger Polylinker mit flankierenden EcoR I-Stellen für eine einfache Exzision von Inserts
• M13 Vorwärts- und Rückwärts-Primerstellen für die Sequenzierung

Funktionsweise von TA Cloning™
Taq-Polymerase hat eine nicht Template-abhängige Aktivität, die ein Einzel-Desoxyadenosin (A) an den 3'-Enden von PCR-Produkten einfügt. Der linearisierte Vektor in diesem Kit weist am 3‘-Ende Desoxythymidin (T)-Überhänge auf. Auf diese Weise können PCR-Inserts effizient mit dem Vektor ligiert werden.

Kit-Konfigurationen
Das TA Cloning™ Kit bietet eine Vielzahl von Konfigurationen: ohne kompetente Zellen (K2020-20 und K2020-40), mit One Shot™ INVF' chemisch kompetentem E. coli (K2000-01 und K2000-40), mit One Shot™ TOP10F' chemisch kompetentem E. coli (K2030-01 und K2030-40) und mit One Shot™ TOP10 chemisch kompetentem E. coli (K2040-01 und K2040-40) in Kit-Größen mit 20 und 40 Reaktionen.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications
Bakterien- oder HefenstammNicht enthalten
KlonierungsmethodeTA Cloning
Zur Verwendung mit (Anwendung)PCR Cloning
Anzahl Reaktionen40 Reaktionen
ProduktlinieTA Cloning
ProdukttypKlonierungskit
PromoterT7
Menge40 rxns
VektorpCR2.1
FormatKit
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
TA Cloning™ Kits enthalten den linearisierten pCR™2.1-Vektor, ExpressLink™ T4 DNA-Ligase, 5X ExpressLink™ T4 DNA-Ligationspuffer, dNTPs, 10X PCR-Puffer, steriles Wasser und Kontrollen.

Alle Komponenten sind bei –20 °C zu lagern. Alle Reagenzien bleiben bei ordnungsgemäßer Lagerung garantiert 6 Monate stabil.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

How do you recommend that I prepare my DNA for successful electroporation of E. coli?

For best results, DNA used in electroporation must have a very low ionic strength and a high resistance. A high-salt DNA sample may be purified by either ethanol precipitation or dialysis.

The following suggested protocols are for ligation reactions of 20ul. The volumes may be adjusted to suit the amount being prepared.

Purifying DNA by Precipitation: Add 5 to 10 ug of tRNA to a 20ul ligation reaction. Adjust the solution to 2.5 M in ammonium acetate using a 7.5 M ammonium acetate stock solution. Mix well. Add two volumes of 100 % ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at 4C. Remove the supernatant with a micropipet. Wash the pellet with 60ul of 70% ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at room temperature. Remove the supernatant with a micropipet. Air dry the pellet. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 ul per transformation of 20 ul of cell suspension.

Purifying DNA by Microdialysis: Float a Millipore filter, type VS 0.025 um, on a pool of 0.5X TE buffer (or 10% glycerol) in a small plastic container. Place 20ul of the DNA solution as a drop on top of the filter. Incubate at room temperature for several hours. Withdraw the DNA drop from the filter and place it in a polypropylene microcentrifuge tube. Use 1ul of this DNA for each electrotransformation reaction.

When should DMSO, formamide, glycerol and other cosolvents be used in PCR?

Cosolvents may be used when there is a failure of amplification, either because the template contains stable hairpin-loops or the region of amplification is GC-rich. Keep in mind that all of these cosolvents have the effect of lowering enzyme activity, which will decrease amplification yield. For more information see P Landre et al (1995). The use of co-solvents to enhance amplification by the polymerase chain reaction. In: PCR Strategies, edited by MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky. Academic Press, San Diego, CA, pp. 3-16.

Additionally, when amplifying very long PCR fragments (greater than 5 kb) the use of cosolvents is often recommended to help compensate for the increased melting temperature of these fragments.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.