TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II Vector and One Shot™ TOP10F' Chemically Competent E. coli
TA Cloning&trade; Kit, Dual Promoter, with pCR&trade;II Vector and One Shot&trade; TOP10F' Chemically Competent <i>E. coli</i>
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TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II Vector and One Shot™ TOP10F' Chemically Competent E. coli

El promotor doble del kit TA Cloning™ con vector pCR™II proporciona una estrategia de clonación rápida y de un pasoMás información
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Número de catálogoN.º de reacciones
K20604040 reacciones
K20600120 reacciones
Número de catálogo K206040
Precio (MXN)
-
N.º de reacciones:
40 reacciones
El promotor doble del kit TA Cloning™ con vector pCR™II proporciona una estrategia de clonación rápida y de un paso para insertar directamente un producto de PCR amplificada con Taq en un vector plasmídico. Los promotores T7 y SP6 del vector pCR™II permiten la transcripción in vitro del inserto para producir productos de sentido o antisentido. El promotor doble del kit TA Cloning usa el vector de clonación pCR™II y ligasa de ADN T4 ExpressLink™ para generar un producto de ligadura en un proceso de ligadura de quince minutos a temperatura ambiente. Las reacciones normalmente producen > 80 % de recombinantes que contienen insertos.

Características del Kit de clonación™ de TA Dual Promoter:
Rápido y cómodo: ligación en 15 minutos a temperatura ambiente
Eficaz: detección azul/blanco y > 80 % de los clones con inserto adecuado
Flexible: elección de resistencia a kanamicina o ampicilina para la selección flexible de antibióticos• Sin
complicaciones:
elimina cualquier modificación enzimática del producto de PCR
Optimizado: no requiere el uso de primers de PCR que contengan sitios de restricción

El vector pCR™II proporciona:
• Salientes 3'-T para ligadura directa de productos de PCR amplificada con Taq
• Promotores T7 y SP6 para transcripción y secuenciación de ARN in vitro
• Poliligador versátil con sitios EcoR I flanqueados para fácil escisión de insertos
• Sitios de primer directo e inverso M13 para secuenciación

Cómo funciona TA Cloning™
La polimerasa Taq tiene un actividad no dependiente de la plantilla que añade una sola deoxiadenosina (A) a los extremos 3' de los productos de PCR. El vector linealizado suministrado en este kit tiene residuos de una sola desoxiadenosina 3' (T). Esto permite a los insertos de PCR ligar de forma eficaz con el vector.

Configuraciones del kit
El kit TA Cloning™ se ofrece en una variedad de configuraciones: con E. coli químicamente competente One Shot™ INVF’ (K2050-01 y K2050-40), E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10F’ (K2060-01 y K2060-40) y sin células competentes (K2750-20 y K2750-40) en tamaños de kit de 20 y 40 reacciones.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Contenido bacterianoTOP10
Cepa bacteriana o de levaduraTOP10F ́
Tipo de célulaE. coli químicamente competente
Método de clonaciónTA Cloning
Para utilizar con (aplicación)Clonación PCR
IncluyeVector pCRII linealizado, ligasa de ADN T4 ExpressLink, tampón de ligación de ADN T4 5X ExpressLink, dNTPs, tampón de PCR 10X, agua esterilizada, controles, E. coli químicamente competente TOP10F' One Shot, medio SOC y un plásmido de control superenrollado.
N.º de reacciones40 reacciones
Línea de productosOne Shot
Tipo de productoKit de clonación
PromotorT7, SP6
Cantidad40 rxns
VectorpCRII
FormatoKit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Este kit contiene el vector pCR™II linealizado, la ligasa de ADN T4 ExpressLink™, el tampón de ligación de ADN T4 5X ExpressLink™, dNTPs, el tampón de PCR 10X, agua estéril y controles. Los kits de células competentes contienen E. coli químicamente competente One Shot™, medio SOC y un plásmido de control superhelicoidal.

Almacene el E. coli de One Shot™ a - 80 °C. Almacene todos los demás componentes a - 20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente.

Preguntas frecuentes

Can I use TOP10F' competent cells for transformation of my TOPO vector that contains the ccdB gene?

Strains that contain an F plasmid, such as TOP10F', are not recommended for transformation and selection of recombinant clones in any TOPO vector containing the ccdB gene. While the F plasmid does encode the CcdA protein, which acts as an inhibitor of the CcdB gyrase-toxin protein, the half-life of the CcdA protein is shorter than that of the CcdB protein. Overexpression of the CcdB protein causes cell death when its action is not prevented by sufficient CcdA.

Have you compared in vitro transcription levels between SP6 and T7 promoters in your pCRII vectors?

No, we have not done in-house comparisons of transcription levels. It is widely known though that T7 polymerase produces more RNA than SP6 (on the order of 10-fold higher).

Citations & References (10)

Citations & References
Abstract
Semaphorin III can function as a selective chemorepellent to pattern sensory projections in the spinal cord.
Authors:Messersmith EK, Leonardo ED, Shatz CJ, Tessier-Lavigne M, Goodman CS, Kolodkin AL
Journal:Neuron
PubMed ID:7748562
'Distinct classes of primary sensory neurons in dorsal root ganglia subserve different sensory modalities, terminate in different dorsoventral locations in the spinal cord, and display different neurotrophin response profiles. Large diameter muscle afferents that terminate in the ventral spinal cord are NT-3 responsive, whereas small diameter afferents subserving pain and ... More
A nod factor binding lectin with apyrase activity from legume roots.
Authors:Etzler ME, Kalsi G, Ewing NN, Roberts NJ, Day RB, Murphy JB
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:10318974
'A lectin isolated from the roots of the legume, Dolichos biflorus, binds to Nod factors produced by rhizobial strains that nodulate this plant and has a deduced amino acid sequence with no significant homology to any lectin reported to date. This lectin also is an enzyme that catalyzes the hydrolysis ... More
timrit Lengthens circadian period in a temperature-dependent manner through suppression of PERIOD protein cycling and nuclear localization.
Authors:Matsumoto A, Tomioka K, Chiba Y, Tanimura T
Journal:Mol Cell Biol
PubMed ID:10330175
A fundamental feature of circadian clocks is temperature compensation of period. The free-running period of ritsu (timrit) (a novel allele of timeless [tim]) mutants is drastically lengthened in a temperature- dependent manner. PER and TIM protein levels become lower in timrit mutants as temperature becomes higher. This mutation reduces per ... More
Kainate receptor subunits expressed in single cultured hippocampal neurons: molecular and functional variants by RNA editing.
Authors:Ruano D, Lambolez B, Rossier J, Paternain AV, Lerma J
Journal:Neuron
PubMed ID:7748549
To determine the kainate receptor subunits that are found in native kainate receptors, we have applied a multiplex PCR of cDNAs reverse transcribed from mRNA harvested from single cultured hippocampal neurons after electrophysiological recording. We found that all the cells showing rapidly desensitizing currents in response to kainate express the ... More
Genetic heterogeneity of hypervariable region 1 of the hepatitis C virus (HCV) genome and sensitivity of HCV to alpha interferon therapy
Authors:Sandres K, Dubois M, Pasquier C, Payen JL, Alric L, Duffaut M, Vinel JP, Pascal JP, Puel J, Izopet J
Journal:J Virol
PubMed ID:10623727
Hepatitis C virus (HCV) populations persist in vivo as a mixture of heterogeneous viruses called quasispecies. The relationship between the genetic heterogeneity of these variants and their responses to antiviral treatment remains to be elucidated. We have studied 26 virus strains to determine the influence of hypervariable region 1 (HVR-1) ... More