pCR™8/GW/TOPO™ TA Cloning Kit with One Shot™ Mach1™-T1R E. coli and PureLink™ Kit
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Invitrogen™

pCR™8/GW/TOPO™ TA Cloning Kit with One Shot™ Mach1™-T1R E. coli and PureLink™ Kit

El kit pCR™8/GW/TOPO™ TA Cloning ofrece una clonación sencilla en 5 minutos y acceso a la plataforma de vectores deMás información
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Número de catálogoCantidad
K25200220 preparaciones
Número de catálogo K252002
Precio (MXN)
-
Cantidad:
20 preparaciones
El kit pCR™8/GW/TOPO™ TA Cloning ofrece una clonación sencilla en 5 minutos y acceso a la plataforma de vectores de clonación de recombinación Gateway™. Nuestro vector pCR™8 TOPO™ TA contiene un MCS mínimo, para que secuencie más inserto y menos vector. Con nuestros sitios att patentados, el vector pCR™8 es la forma más sencilla de crear un clon de entrada, lo que facilita el acceso mediante la clonación de recombinación Gateway™ a una variedad de vectores de expresión sin la tediosa subclonación, lo que supone un valioso ahorro de tiempo de investigación.

El kit pCR™8/GW/TOPO™ TA Cloning incluye:
E. coli de rápido crecimiento que reduce el tiempo de clonación
• Máxima comodidad: incluye un kit de minipreparación de plásmidos
• Sitios att para una recombinación rápida en cualquier vector de destino Gateway™
• Salientes 3'-T para la ligación directa de productos de PCR amplificados con Taq
• Sitios de primers de secuenciación a 55 bp del sitio de inserción que garantizan más secuenciación de injerto y menos vector
• Gen de resistencia a la espectinomicina para una sólida selección en E. coli
• Sitios EcoR I que flanquean el sitio de inserción del producto de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para una sencilla escisión de insertos

Este kit incluye E. coli químicamente competente One Shot™ Mach1™-T1R y un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink™.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de clonaciónTOPO™ con Gateway™
N.º de reacciones20 preps
Línea de productosOne Shot
Tipo de productoKit de clonación de TA
Cantidad20 preparaciones
VectorpCR
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Vector pCR™8/GW/TOPO™, dNTP solución salina, agua estéril, primers de secuenciación de sentido directo e inverso Gateway, plantilla de control y primers de PCR, E. coli TOP10 químicamente competente One Shot™, E. coli químicamente competente, medio SOC. y un plásmido de control de pUC19. El kit de minipreparación de plásmidos PureLink™ Quick contiene tampón de resuspensión, ARNasa A, tampón de lisis, tampón de preparación, tampón de lavado, tampón de TE, columnas de centrifugación y tubos recuperación y lavado. Almacenar todos los componentes del kit PureLink™ a temperatura ambiente. Almacenar la E. coli One Shot™ a -80 °C. Almacene todos los demás componentes a - 20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente.

Preguntas frecuentes

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

Your Gateway-adapted TOPO vectors are supplied with a control template and control primers. Can I obtain the sequence of the control template?

The sequence of the control template is proprietary.

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.