TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with pCR™4-TOPO™ Vector, One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli, and PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit

Die TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Sequenzierung bieten eine äußerst effiziente, 5-minütige Klonierungsstrategie in einem Schritt („TOPO™ Cloning“) für die direkte Einführung der Taq-Polymerase-amplifizierten PCR-Produkte in einen Plasmidvektor zur Sequenzierung. In jedem Kit wird der pCR™4-TOPO™ TA-Vektor mit speziell gestalteten Sequenzierungs-Primerstellen verwendet, die aus jeder Reaktion mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz ergeben. Diese Kits enthalten alles Notwendige zur Klonierung und Selektion rekombinanter Vektoren, die das PCR-Fragment Ihrer Wahl enthalten.

• Mehr Sequenz: Ermöglicht mehr Insertsequenz und weniger Vektorsequenz bei der Verwendung von Standard-Sequenzierungs-Primern
• Schnell und einfach: Von der PCR zum Klon in nur drei Schritten und 5 Minuten
• Effizient: Bis zu 95 % Klone mit korrektem Insert
• Bewährt: Zuverlässige Leistung seit mehr als zehn Jahren mit über 4.000 Referenzen

TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Sequenzierung – Übersicht
• VEKTOR: pCR™4-TOPO™ TA-Vektor: Optimierter Klonierungsvektor für verbesserte Sequenzierungsergebnisse
• KLONIERUNGSMETHODE: TOPO™ TA Cloning: Ligation von PCR-Produkten auf Basis von Topoisomerase I in 5 Minuten mit 3´A Überhängen (Taq-amplifiziert) mit dem Vektor
• KOMPETENTE ZELLEN: Verschiedene Optionen: Wählen Sie aus Kits mit allgemeinen, hocheffizienten, bakteriophagen T1-beständigen oder schnell wachsenden kompetenten Zellen

pCR™4-TOPO™ TA-Vektor: Optimiert für die Sequenzierung
Ein Großteil der multiplen Klonierungsstellen wurde vom pCR™4-TOPO™ TA-Vektor entfernt, um den Abstand zwischen Sequenzierprimer- und Insert-Stellen auf maximal 33 bp zu verkürzen. Dies bedeutet, dass Sequenzierreaktionen weniger Vektorsequenz und mehr Insertsequenz ergeben. Der pCR™4-TOPO™ TA-Vektor bietet Bindungsstellen für 4 Standard-Sequenzierungsprimer: M13 forward, M13 reverse, T7 und T3. Davon enthalten die Kits je einen Aliquot.

pCR™4-TOPO™ TA-Klon-Selektion und -Manipulation
Der pCR™4-TOPO™ TA-Vektor enthält Ampicillin- und Kanamycin-Resistenzmarker und eine LacZα-ccdB-Genfusion für eine Positivselektion und das Blau-Weiß-Screening. Die minimierte multiple Klonierungsstelle des Vektors umfasst abgrenzende EcoRI-Schnittstellen für eine vereinfachte Exzision klonierter PCR-Produkte und eine einzigartige Sse8387I-Stelle für Nested Deletions vor der Sequenzierung. T7- und T3-Promoter sind auch für die In-vitro-Transkription vorhanden.

Vereinfachte TOPO™-basierte Klonierung
Mit dem TOPO™-Verfahren sind für die Klonierung weder PCR-Primer mit spezifischen integrierten Sequenzen, noch Post-PCR-Verfahren, Vektorpräparation oder andere zeitintensive Schritte zur DNA-Manipulation erforderlich. Geben Sie Ihre PCR-Reaktion einfach zum mitgelieferten Vektor mit gebundener Topoisomerase, warten Sie 5 Minuten, und führen Sie die Transformation in kompetente E. coli-Zellen durch.

Effiziente Klonierung
Mit bis zu 95 % der Klone, die das gewünschte Insert tragen, können Sie das Screening der Klone reduzieren und somit Zeit und Geld sparen. Der in diesem Kit verwendete pCR™ 4-TOPO™ TA-Vektor enthält 3´T-Überhänge für eine effiziente Ligation von Taq-amplifizierten PCR-Produkten mit 3´A-Überhängen.

Der Standard für die Klonierung
Bei der Klonierung ist das TOPO™ Verfahren bereits seit über zehn Jahren ein verlässlicher Partner für Tausende von Wissenschaftlern. Die schnelle, einfache und effiziente TOPO™ Klonierung kam bereits bei einer Vielzahl von Vektoren und in unterschiedlichsten Anwendungen zum Einsatz.

TOPO™ TA Cloning™ Kits für die Sequenzierung – Kit-Optionen
Das TOPO™ TA Cloning™ Kit für die Sequenzierung ist mit einer Vielfalt kompetenter Zellen erhältlich, die verschiedene Vorteile entsprechend Ihren Anforderungen bieten:

• Allgemeine Klonierung: TOP10 (Kat.-Nr. K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Hocheffiziente Klonierung: TOP10 Electrocomp™ Zellen (Kat.-Nr. Nr. K4580-01, K4580-40)
• Klonierung allgemein, Resistenz gegen Bakteriophagen T1: DH5α-T1R (Kat.-Nr. Nr. K4595-01, K4595-40)
• Schnelles Wachstum: Mach1™-T1R chemisch kompetente E. coli (Kat.-Nr. Nr. K4530-20)

Wir bieten auch eine Version des Kits mit PureLink™ Quick Plasmid-Miniprep-Kit (Kat.-Nr. K4575-02), entwickelt zur Isolierung eines sauberen, sequenzierungsbereiten, rekombinanten Plasmids.

TOPO™ Produkte sind nur zu Forschungszwecken zu verwenden. Nicht für therapeutische oder diagnostische Zwecke an Tieren und Menschen vorgesehen.

Verwandte Links
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